Au@SiO2@CuInS2-ZnS量子点探针对肝癌细胞的靶向标记及热疗的研究

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目的:合成一种新型金纳米星-二氧化硅-硫铟铜硫化锌抗甲胎蛋白抗体(Au@SiO2@CuInS2/ZnS-anti-AFP)量子点探针并探究其对肝癌细胞的靶向标记和荧光成像能力、细胞毒性、光热效率以及热疗效应,以期为肝癌诊治提供新的方法。方法:通过免疫组化方法检测肝癌细胞系HepG2的甲胎蛋白表达情况。采用水热法合成金纳米星-二氧化硅-硫铟铜硫化锌抗甲胎蛋白抗体复合探针与金纳米笼硫铟铜硫化锌抗甲胎蛋白抗体复合探针,并进行理化和生物学性能比较。Hep-G2细胞株与探针孵育后激光共聚焦显微镜用于检测探针的靶向标记和荧光成像能力,MTT法用于检测探针的细胞抑制率以评价探针的生物相容性。Hep-G2细胞与探针孵育,用808nm、1.5W/cm2的激光对细胞培养液照射,用温度计检测光热热疗时细胞培养液温度;使用流式细胞术检测热疗细胞凋亡率。结果:免疫组化实验结果显示,Hep-G2细胞胞质和细胞膜呈现褐色,胞核呈现蓝色,胞质和胞膜强阳性表达AFP。靶向标记实验:激光共聚焦显微镜观察到HepG2细胞质被520nm波长光的激发下发出黄色荧光,细胞核被360nm波长光的激发下发出蓝色荧光。MTT实验显示,在2h、12h和24h,浓度为20%的金纳米星探针对HepG2细胞抑制率较20%的金纳米笼探针明显降低(0.61±0.0105VS 0.167±0.0117;0.201±0.0111 VS 0.467±0.0272;0.387±0.0446 VS 0.774±0.0375;P<0.05)。光热实验显示,20%的金纳米星探针的温度上升速度和平台期温度明显高于20%的金纳米笼探针(45.5℃,43.3℃),差异具有统计学意义(Z=-5.895,P<0.001)。热疗实验结果显示,金纳米星探针热疗凋亡率40min进入95%-98%平台期;金纳米笼探针凋亡率需要50min后逐渐稳定至86%平台期。两种探针热疗实验平台期凋亡率差异有统计学意义,金纳米星探针热疗效果显著高于金纳米笼探针(Z=-4.846,P<0.001)。结论:(1)AFP在肝癌细胞系HepG2的胞质和胞膜上表达。(2)新型金纳米星探针通过抗原抗体反应对HepG2细胞进行特异性的靶向识别和标记,并可以通过量子点激发的荧光对细胞进行荧光成像。(3)20%的金纳米星探针的细胞毒性比20%的金纳米笼探针有显著的减小,生物相容性优良。(4)20%的新型金纳米星探针比20%的金纳米笼探针具有更高的光热温度(45.5℃,43.3℃,Z=-5.895,P<0.001),在热疗时拥有更高的细胞杀伤率(Z=-4.846,P<0.001),光热热疗效率更高。
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