第一部分低剂量LPS反复刺激下诱导牙髓干细胞发生DNA双链断裂的研究目的:探讨低剂量条件下脂多糖诱导牙髓干细胞DNA损伤方法,为研究脂多糖诱导牙髓干细胞DNA双链断裂及DNA修复提供实验模型。方法:10ng/ml脂多糖连续刺激牙髓细胞1、3、6次后,采取MTT及TUNEL分别检测其对牙髓细胞增殖及凋亡的作用;采用RT-PCR及免疫印迹检测γ-H2A.X的mRNA及蛋白水平的表达;使用免疫荧光及免疫组化法观测γ-H2A.X在体内、外的表达。结果:与对照组相比,1Ong/ml脂多糖连续刺激对牙髓干细胞增殖及凋亡均无显著性差异（P>0.05）;脂多糖连续刺激6次后细胞免疫荧光显示在细胞核检测到γ-H2A.X的阳性表达,且蛋白及mRNA水平的表达较对照组有显著性增加（P<0.05）;免疫组化结果表明在脂多糖诱导4、6、8天后,γ-H2A.X在大鼠牙髓组织较对照组表达水平显著升高（P<0.05）。彗星实验显示实验组DNA拖尾现象显著（P<0.05）,细胞DNA损伤程度为中度损伤（细胞损伤率为20%-40%）。结论:低剂量脂多糖连续刺激可诱导牙髓干细胞产生DNA双链断裂。第二部分炎症状态下牙髓干细胞DNA损伤修复通路表达的研究目的:研究炎症环境下,牙髓干细胞发生DNA双链断裂后经典的修复信号通路的表达。方法:RT-PCR及免疫印迹检测NHEJ修复通路中重要基因与蛋白Ku70和Xrcc4,以及HR修复通路中重要基因与蛋白Rad51和Rad54的表达。结果:RT-PCR及免疫印迹结果均表明Ku70和Xrcc4在mRNA及蛋白水平均有显著升高（P<0.05）,而Rad51表达虽有显著升高（P<0.05）,但作为HR通路后续阶段的Rad54表达却未有显著变化（P>0.05）。结论:炎症状态下,牙髓干细胞DNA双链断裂发生后,NHEJ修复通路发挥重要作用。第三部分炎症环境下Ku70调节牙髓干细胞增殖和凋亡目的:探讨炎症状态下,NHEJ修复通路中关键蛋白Ku70在牙髓干细胞增殖和凋亡中的作用。进一步理解Ku70在维护基因组稳定中的作用,为今后研究Ku70是如何发挥作用奠定基础。方法:实验分为六组,正常对照组（con组）:牙髓干细胞只加生理盐水;siRNA对照组（nc组）:牙髓干细胞中加入一段无义序列;实验组一（1ps组）:牙髓干细胞中加入LPS,每24小时刺激一次,每次6小时,共刺激6次;实验组二（siRNA组）:DPSCs在接种后的第三日转染Ku70siRNA;实验组三（nc+lps组）:牙髓干细胞中加入LPS,每24小时刺激一次,每次6小时,共刺激6次并在接种后第三日转染一段无义序列;实验组四（siRNA+lps组）:DPSCs中加入LPS,每24小时刺激一次,每次6小时,共刺激6次并在细胞接种于培养皿后第三日转染Ku70siRNA。MTT检测细胞活力;采用RT-PCR及免疫印迹检测DNA双链断裂标志物γ-H2A.X,NHEJ修复通路中Ku70和Xrcc4以及HR修复通路中Rad51和Rad54的mRNA及蛋白水平的表达;通过流式细胞术检测细胞凋亡;利用TUNEL法与细胞免疫荧光共染法检测γ-H2A.X与凋亡小体在细胞核中的共表达。结果:MTT结果显示与实验组三（nc+lps组）相比,Ku70基因沉默后牙髓干细胞增殖显著降低（P<0.05）;γ-H2A.XmRNA及蛋白的表达显著升高（P<0.05）;Ku70,Xrcc4,Rad54表达减低明显（P<0.05）,而Rad51表达显著升高（P<0.05）;细胞出现20%左右的早期凋亡与晚期凋亡,γ-H2A.X与凋亡小体出现在细胞核的同一位置。结论:炎症环境下Ku70调节牙髓干细胞的增殖和凋亡。