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第一部分 自噬抑制剂Spaut in-1增强骨肉瘤对顺铂化疗敏感性目的：骨肉瘤是一种源于间叶组织高侵袭性和高转移性的原发性恶性肿瘤,好发于儿童和青少年。骨肉瘤早期诊断比较困难,多数患者就诊时已发生远处转移,目前骨肉瘤的治疗提倡以手术为主、化疗为辅的综合性治疗。新辅助化疗方案的应用提示术前化疗的效果对手术治疗的效果以及疾病的预后起着决定性作用。尽管近年来联合化疗的药物和支持治疗的水平有所进步,但骨肉瘤对化疗药物仍有较高的耐药性,不利于骨肿瘤的术前控制以及术后巩固治疗。因此,探讨增强骨肉瘤化疗敏感性的分子机制,对于骨肉瘤的前期及后期治疗有着重要的理论和实际意义。方法：1.探讨Spautin-1对骨肉瘤细胞（U2OS）的增殖的影响：应用CCK8检测试剂盒检测Spautin-1对U2OS增殖的影响,应用Caspase活性检测试剂盒检测细胞中内源性与外源性凋亡通路相关的Caspases（Caspase-3,8,9）的活性；应用Western-blotting技术检测Caspase-3,8,9的剪切,应用流式细胞术检测Annexin V标记的阳性凋亡细胞。2.探讨Spautin-1对顺铂（Cisplatin）介导的U2OS细胞增殖抑制的影响：培养U2OS细胞,单独使用顺铂或加用Spautin-1,用CCK8检测试剂盒检测细胞存活率。3.探讨Spautin-1及顺铂对U2OS的细胞凋亡的影响：培养U2OS细胞,单独使用顺铂处理或加用Spautin-1,应用流式细胞检测仪,分析Spautin-1对顺铂对U2OS细胞凋亡的影响。4.Spautin-1对U2OS的细胞自噬的影响：Western blotting检测Spautin-1对于顺铂介导的U2OS细胞自噬的影响结果：1.有效自噬浓度的Spautin-1对U2OS的增殖和凋亡无明显影响：CCK8法检测,Spautin-1对U2OS细胞的增殖无明显影响。Western blot和流式细胞术检测显示U2OS的细胞凋亡亦无明显变化。2.Spautin-1可明显增强顺铂对U2OS细胞增殖的抑制：CCK8法检测,可见顺铂对于U2OS细胞的生长抑制作用呈现出浓度依赖性,Spautin-1与顺铂共处理的细胞增殖明显抑制。3.Spautin-1可明显促进顺铂介导的U2OS的细胞凋亡：Spautin-1与顺铂共处理后,流式细胞仪检测U2OS的早期和晚期凋亡比例由16.5%增长到35.0%。Western blot检测显示,切割后的Caspase3和PARP均有明显的升高。4.Spautin-1可明显抑制顺铂介导的U2OS细胞自噬：Western blot检测显示顺铂可明显增强U2OS的细胞自噬。Spautin-1与顺铂共处理细胞后,可明显抑制顺铂介导的细胞自噬。结论：1.自噬抑制剂Spautin-1对U20S的增殖和凋亡无明显影响；2. Spautin-1可明显增强顺铂对U2OS细胞增殖的抑制；3.Spautin-1可明显促进顺铂介导的U2OS的细胞凋亡；4.Spautin-1可明显抑制顺铂介导的U2OS细胞自噬。第二部分 骨水泥作为顺铂缓释载体的初步研究目的：骨肉瘤是最常见的原发性恶性肿瘤之一,目前临床中常用的手术方法为局部刮除。此类手术所会造成骨缺损以及存在局部复发的可能。骨水泥作为临床中较为常用的生物填充材料用于骨缺损修复,同时可以复合化疗药物起到局部化疗的作用。因此,对骨水泥作为化疗药物缓释载体的研究,对骨肉瘤的治疗及预后有着重要的理论和实际意义。方法：1.探讨高温对顺铂的生物活性的影响：顺铂溶于0.9%生理盐水后,于75℃处理10min,以骨肉瘤细胞（U20S）为研究对象,探索其生物活性的稳定性。2.探讨复合顺铂的聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥（PMMA）的物理性质：以骨水泥（PMMA）和顺铂（Cisplatin）为研究对象,按一定的比例混合后,进行抗压、抗弯物理性能的测量。3.以复合顺铂骨水泥的洗涤液与U20S为研究对象：CCK8法检测洗涤液中顺铂生物活性的稳定性。结果：1.高温处理对顺铂的生物活性无明显改变。2.复合顺铂的骨水泥物理性质无明显改变：抗压、抗弯强的无明显改变。3.复合骨水泥释放的顺铂的生物活性无明显改变结论：1.高温对顺铂的化疗效果无影响。2.复合顺铂骨水泥的理化性质无明显改变。3.复合骨水泥释放顺铂的生物活性无明显改变。