目的：探讨结核分枝杆菌耐药基因rpoB突变与利福平耐药性的关系，利用核酸导流杂交技术快速检测rpoB基因突变。方法：收集81例结核分枝杆菌临床分离株，PCR扩增rpoB含利福平耐药决定区域在内的基因片段，对全部81例标本的PCR产物进行测序分析并与利福平药物敏感试验结果进行比较，选取包括20例测序存在突变的标本和11例测序为野生型的标本在内的共31例标本进行导流杂交，结果与测序结果进行对照，用TA克隆产物做阳性对照。结果：81例结核分枝杆菌临床分离株中，27例耐利福平菌株中20株发生rpoB基因突变（74.1％），突变位点包括531和526在内的7个位点10种突变类型，并发现新的突变位点和突变形式，目前已被美国GeneBank收录；54株敏感株中，1株发生突变（1.9％）。31例标本的导流杂交与测序结果对比显示，14株杂交为野生型，测序发现3株存在突变，17株杂交存在突变，测序结果与之吻合，敏感度为85％，特异性为100％，阳性预测值为100％，阴性预测值为78.6％，薄膜杂交检测与DNA测序结果符合率为90.3％。TA克隆标本杂交结果与预期结果一致。结论：rpoB基因突变是导致结核分枝杆菌耐利福平的主要机制之一，其突变形式存在一定的区域差异；通过核酸薄膜导流杂交技术可以快速、简便、灵敏地检测结核分枝杆菌rpoB基因突变。