具有生物活性的水凝胶神经移植物的构建及表征

来源 :南通大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:lalalalalaaa
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目的周围神经损伤后的有效修复及功能恢复仍然是目前临床上研究的热点,也是神经损伤亟待解决的主要问题。本研究旨在构建一种具有生物活性的复合水凝胶神经移植物,并探讨其对周围神经再生的影响,研究其该生物活性复合水凝胶对施万细胞生长行为的有效调控及其导管作为3D支架相关的物理化学表征。本研究为新型人工神经移植物的设计和开发提供有力的参考。方法将海藻酸钠、明胶、聚丙烯酰胺、氧化石墨烯不同成分不同体积混合,优化筛选出能较好成胶并具有一定力学性能的聚丙烯酰胺/氧化石墨烯/明胶/海藻酸钠(PAM/GO/Gel/SA,PGGS)复合水凝胶。通过宏观观察、光学显微镜观察(OM)、扫描电子显微镜观察(SEM)对PAM/GO/Gel/SA多组分复合水凝胶材料进行表面形貌分析;通过傅立叶红外光谱(FTIR)检测进行成分分析;通过测试水凝胶的孔隙率研究复合水凝胶是否能在一定程度上进行物质交换,并在相应条件下测试了水凝胶的溶胀性能;通过拉伸和压缩实验以及体外降解测试评价水凝胶的力学性能以及稳定性等;采用L929成纤维细胞共培养评价其细胞毒性;将PAM/GO/Gel/SA四组分复合水凝胶进行YIGSR和IKVAV两种多肽表面修饰处理,采用RSC96施万细胞共培养进行优化筛选来评价复合水凝胶对细胞的生长行为的影响,采用BCA蛋白浓度检测评价基质蛋白吸附;用实时定量聚合酶链式反应对不同复合水凝胶上细胞的基因表达进行分析,并利用流式细胞技术对细胞周期进行了研究。在以上研究的基础上筛选出促进细胞生长的具有生物活性的水凝胶体系并制备出具有生物活性的水凝胶复合导管,对导管的形态结构进行相关表征。结果本研究成功制备了PAM/GO/Gel/SA复合水凝胶,光镜结果表明随着水凝胶成分的变化,PAM/GO/Gel/SA复合水凝胶随着海藻酸钠以及明胶的加入较其颜色比PAM/GO0.4浅,但PAM/GO/Gel/SA复合水凝胶颜色差异较小。扫描电镜观察显示水凝胶表面具有一定大小的孔状结构。傅立叶红外光谱分析结果表明不同成分可以成功聚合,溶胀、孔隙率的测试结果表明该复合水凝胶具有一定的吸水性能,力学测试发现该复合水凝胶具有良好的柔韧性,海藻酸钠和明胶的加入使得该复合水凝胶在拉伸方面的力学的改变。降解实验表明复合水凝胶浸泡在磷酸盐缓冲液(PBS)中15天未见明显的降解行为,具有较好的稳定性。L929成纤维细胞培养结果表明该复合水凝胶无细胞毒性,可以支持细胞生长。施万细胞培养结果表明,YR多肽固定之后的复合水凝胶能够很好地支持施万细胞的粘附和增殖。流式细胞分析结果表明YR浓度为0.5 mg/mL以及1mg/mL(PGG0.5SYR1和PGG1SYR0.5)时适宜施万细胞增殖生长,在基因表达水平上PGG0.5SYR1和PGG1SYR0.5中Sox10、GAP43、MBP的基因表达水平均上调且PGG0.5SYR1和PGG1SYR0.5上施万细胞的DNA合成高于其它水凝胶,说明该复合水凝胶较好地适合施万细胞生长。另外,利用自制的内径为2 mm、外径为6 mm的模具成功制备了PGG1S水凝胶导管,导管的理化性能测试说明了该水凝胶导管具有较好的弹性性能,内外径分析结果表明制备的水凝胶导管管壁均匀。结论本研究首先成功制备出了PAM/GO/Gel/SA复合组分水凝胶,发现用于修饰水凝胶的YR多肽浓度为0.5 mg/mL以及1 mg/mL时能有效促进施万细胞生长和增殖;其次,成功制备出了PGG1S和PGG1SYR0.5水凝胶导管,并期望其在神经损伤修复方面发挥重要作用。本研究可为组织工程的水凝胶支架的设计、应用和开发提供重要的理论和实验依据。
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