论文部分内容阅读
本研究通过制备土霉素(oxytetracycline, OTC)的特异性抗体,建立了蜂产品中土霉素残留的酶联免疫吸附分析法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)。具体包括以下四个方面的内容: 1 土霉素人工抗原的构建 OTC分子量为460.2,是只有反应原性而无免疫原性的小分子物质,必须与蛋白质等载体结合转化为完全抗原后才能刺激动物产生抗体。由于OTC分子结构中含有氨基,所以可以以该基团为“桥梁”将OTC和载体蛋白连接起来。 本研究首先分别以碳化二亚胺(1-ethy 1-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride, EDC)和戊二醛(commercial glutaraldehyde, GA)作为偶联剂,将OTC与牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA)进行偶联,合成了复合物OTC-BSA,并分析了不同连接剂对蛋白偶联效果的影响。结果表明,以EDC或GA为偶联剂,均可得到OTC与BSA的偶联物,但是偶联物中OTC与BSA的摩尔比有很大的差异,以EDC为偶联剂时OTC:BSA摩尔比为4.00:1,而以GA作为偶联剂时仅为2.58:1,这说明EDC的偶联效果比GA的好。 进一步就OTC与BSA偶联时,BSA、OTC及偶联剂的混合方法对偶联物摩尔比的影响进行了研究,结果显示,向BSA溶液中边搅拌边缓慢地滴加OTC和EDC溶液时OTC-BSA偶联物中OTC与BSA的摩尔比较高,达7.97:1。该连接物注射BALB/c小鼠后能获得较好的抗体。 本研究还在上述研究的基础上制备了OTC与卵清白蛋白(ovalbumin, OV)的偶联物OTC-OV。 2 抗OTC抗体的制备 以自制的OTC-BSA(摩尔比为7.97:1)连接物为免疫抗原注射BALB/c小白鼠,从抗体的产生进程来看,小鼠在第一次免疫后45天开始有明显的抗体产生,90天达到高峰,然后开始下降,间接非竞争ELISA测得其最高效价为1:20,000;进一步用间接竞争ELISA分析了此抗体的灵敏度与特异性,结果表明,所得抗体的灵敏度和特异性都较好,和其它结构相似或相近物质的交叉反应率较低。 3 几种蜂产品中OTC的ELISA检测 对蜂蜜、蜂花粉、蜂王浆中OTC的提取方法进行了研究,得出了它们的最佳提