马铃薯病毒病是制约马铃薯产业、造成种薯质量不合格的重要因素之一,马铃薯X病毒（Potato virus X,PVX）单独侵染马铃薯时症状较轻,但与马铃薯Y病毒属复合侵染产生细胞坏死。P25蛋白是PVX编码具有RNA解旋酶活性、核苷酸结合和沉默抑制子功能的多功能蛋白,是PVX中三联模块运动蛋白之一。有研究表明P25蛋白的阈值积累是马铃薯X病毒协同效应中造成系统性坏死的主要原因,P25诱导内质网（Endoplasmic Reticulum）应激和未折叠蛋白反应（unfolded protein response,UPR）导致ER崩溃从而产生细胞坏死,然而参与P25蛋白诱导细胞坏死机制的相关寄主因子尚未明确。在本课题中,我们利用双35S启动子构建载体在本氏烟植株中单独表达P25,发现通过高浓度的农杆菌瞬时表达P25时可以诱导细胞坏死,且P25诱导的细胞坏死与H₂O₂的积累量有关。在前期利用免疫共沉淀（Co-immunoprecipitation,Co-IP）联合质谱（MS）技术分析筛选与P25互作的候选蛋白,经过严格的筛选条件,我们筛选到一个相关寄主因子Nb ALY916,并通过双分子荧光互补（Bimolecular Fluorescence complementation,Bi FC）和Co-IP实验证实了P25与Nb ALY916的互作关系。我们发现Nb ALY916是一种多功能核定位蛋白,在本氏烟中有三个同源基因,分别为ALY617、ALY1693和ALY615,通过实时荧光定量PCR发现P25特异性上调Nb ALY916。利用烟草脆裂病毒（Tobacco rattle virus,TRV）诱导的基因沉默（Virus induced gene silencing,VIGS）技术对Nb ALY916系统沉默,发现沉默Nb ALY916未对植株的生长发育造成影响。在沉默Nb ALY916植株上表达P25,P25诱导的细胞坏死减轻,P25的积累量增多;将P25与Nb ALY916在植株中共表达发现P25诱导的细胞坏死加重,P25积累量减少,Nb ALY916可能通过自噬途径和蛋白酶体途径降解P25,这说明P25诱导的细胞坏死与P25的积累量无关,而与Nb ALY916有关。单独表达Nb ALY916之后发现Nb ALY916自身可以诱导细胞死亡,且Nb ALY916诱导的细胞坏死与H₂O₂积累量有关,由此我们推断P25通过上调Nb ALY916诱导细胞死亡。在沉默Nb ALY916的植株上接种PVX-GFP,发现接种叶上荧光斑点无显著变化,系统叶上荧光斑点明显增多,病毒系统侵染率明显加快,且PVX-GFP的CP积累增多,说明下调Nb ALY916后,有利于病毒的系统侵染。综上所述,本研究鉴定了一个寄主蛋白Nb ALY916并发现该蛋白参与了P25诱导细胞坏死,沉默Nb ALY916缓解了P25诱导的细胞坏死,并促进了PVX的系统侵染。这些研究为进一步了解P25的多功能性提供理论基础,同时发现Nb ALY916参与了植物对病毒的抗性。