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目的:探讨利拉鲁肽调控BV2细胞炎症反应进而对A1型反应性星形胶质细胞产生的影响及该过程对TBI后SD大鼠小胶质细胞炎症反应及A1型反应性星形胶质细胞产生的影响及其机制。方法:(1)培养BV2细胞,在光镜下观察其形态,并采用免疫荧光鉴定其表面特异性标记物Iba-1及利拉鲁肽受体GLP-1R的表达。(2)调整BV2细胞状态至较好时接种于激光共聚焦皿中,将细胞分为3组,分别为正常组,LPS组,利拉鲁肽+LPS组。经LPS处理24小时后,各组光镜观察细胞形态后行免疫荧光检测细胞表面抗原i NOS及Iba-1的表达情况,提取各组细胞蛋白检测PKA及CREB蛋白表达情况,提取各组细胞RNA行q RTPCR检测TNF-α,IL-1α及C1q的表达情况。(3)培养原代星形胶质细胞,在光镜下观察其形态,并采用免疫荧光鉴定其表面特异性标记物GFAP及利拉鲁肽受体GLP-1R的表达。调整细胞状态至较好时接种于激光共聚焦皿中,将细胞分为3组,将3组BV2细胞的培养基加入星形胶质细胞培养基处理24小时后,行免疫荧光法检测细胞表面GFAP及C3的表达情况。(4)将60只雄性成年健康SD大鼠随机分为3组Sham组、TBI组,利拉鲁肽组(TBI+利拉鲁肽)。Sham组开骨窗,TBI组使用e CCI进行重度TBI造模(速度5 m/s,深度1.8mm,击锤停留时间130 ms),利拉鲁肽组在TBI后即可皮下注射利拉鲁肽200mg/kg,连续14天。(5)对大鼠TBI后7 d、14 d、28d行m NSS评分并于造模后23d开始行Morris水迷宫试验比较各组大鼠神经功能缺损情况。(6)将大鼠处死后,4%多聚甲醛灌流取脑后,切片行HE染色检测脑组织炎症情况,行免疫荧光法检测TBI组大鼠GLP-1R在大脑的表达,小胶质细胞活化及A1型星形胶质细胞表达。(7)生理盐水灌流取脑后,行WB检测PKA及CREB蛋白的表达情况,用q RT-PCR检测促炎因子TNF-α,IL-1α及C1q的表达情况。结果:(1)显微镜下观察BV2细胞,基本成球形。免疫荧光检测结果显示细胞表面表达Iba-1及GLP-1R,证明该细胞株纯度较高且表达存在利拉鲁肽受体GLP-1R。(2)LPS处理后24小时后,LPS组细胞较Sham组细胞明显表达INOS,而利拉鲁肽预处理组i NOS表达较LPS组明显下降(P<0.05),差异具有统计学意义。WB结果显示Sham组p-PKA/PKA,p-CREB/CREB的比值显著高于LPS组和利拉鲁肽组,而利拉鲁肽预处理组比值则高于LPS组(P<0.05)。q RT-PCR结果显示LPS处理后细胞TNF-α,IL-1α及C1q表达明显升高,利拉鲁肽可以抑制其升高。(3)提取的原代星形胶质细胞在光镜下伸出轴突,GFAP染色证明其纯度于99%可以用于后续实验,且星形胶质细胞不表达GLP-1R受体。(4)将3种小胶质细胞的培养基用于培养星形胶质细胞24小时后观察LPS刺激组小胶质细胞培养基培养星胶轴突伸长,胞体增大,大量表达A1型星形胶质细胞的标记物C3,而利拉鲁肽预处理组细胞表达的补体C3含量较少。(5)HE结果显示TBI大鼠脑组织局部炎性细胞大量浸润,脑组织水肿较重,利拉鲁肽改善了大鼠脑组织的局部炎性浸润。免疫荧光结果显示利拉鲁肽降低了大鼠脑组织TBI后i NOS,Iba-1,C3及GFAP的表达。(6)大鼠脑组织WB结果显示:Sham组p-PKA/PKA,p-CREB/CREB的比值显著高于TBI组和利拉鲁肽组,而利拉鲁肽组比值则高于TBI组(P<0.05)。q RTPCR结果显示LPS处理后细胞TNF-α,IL-1α及C1q表达明显升高,利拉鲁肽可以抑制其升高。(7)m NSS评分结果显示:TBI组大鼠m NSS评分在造模后7d,14d,28d较Sham组明显升高,而利拉鲁肽组大鼠评分明显低于TBI组大鼠(P<0.05)。水迷宫结果显示:TBI组大鼠Morris水迷宫试验的平台穿越次数及目标象限停留时间较Sham组和利拉鲁肽组均减少,逃避潜伏期均延长,利拉鲁肽组大鼠的逃避潜伏期较TBI组下降,平台穿越次数及目标象限停留时间均延长。结论:1.利拉鲁肽可以抑制LPS诱导的小胶质细胞活化,也可以减轻TBI后脑损伤区周围的炎性反应。2.利拉鲁肽可以通过PKA/CREB信号通路调控小胶质细胞炎症,进而发挥利拉鲁肽的抗炎作用。3.小胶质细胞炎症被抑制后,可以大量减少炎性细胞因子的释放,从而抑制了A1型反应性星形胶质细胞的生成,改善TBI后的神经功能恢复。