戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)是一种主要经粪-口途径传播的病毒性肝炎病原体,可以跨种间感染人和多种动物。戊型肝炎在亚洲和非洲国家不断暴发流行,已经成为严重的全球性负担,在一些发展中国家占到急性病毒性肝炎的50%,孕妇感染HEV死亡率高达25%,尤其对于妊娠晚期女性,病情会加剧,重型肝炎的发生率及病死率显著升高,会将病毒垂直传播给后代,并且易发生早产、流产或死胎。因此,迫切需要了解HEV感染对妊娠期女性的致病机理。本文旨在细胞水平研究妊娠期雌激素、孕激素对HEV复制的影响及其作用机制,为探究HEV感染孕妇高死亡率的致病机制奠定基础。本研究工作主要包括四个方面:(1)不同妊娠期血清对HEV复制的影响;(2)雌激素、孕激素对HEV复制的影响;(3)雌激素信号通路与HEV复制的相关性;(4)HEV感染对孕鼠的影响。(1)不同妊娠期血清对HEV复制的影响妊娠期雌激素、孕激素较正常人群显著升高。本文中检测HEV感染孕妇,血清雌激素与孕激素水平,结果显示较胎牛血清显著升高。为模拟HEV在不同妊娠期的复制机制,采用A549细胞,通过添加不同妊娠期血清维持培养HEV,在培养6天后,利用Western bolt法检测病毒,与添加非妊娠育龄妇女血清、儿童、妊娠早期血清和胎牛血清组相比,可观察到添加孕妇晚期血清组HEV衣壳蛋白(ORF2)表达量显著增加。(2)雌激素、孕激素对HEV复制的影响为进一步明确妊娠期雌激素、孕激素升高与HEV感染的相互作用关系,体外实验中,添加不同浓度雌激素模拟妊娠期雌激素水平,发现雌激素能够促进病毒复制,尤其是模拟感染HEV孕妇晚期血清组(4800pg/mL);添加不同浓度孕激素模拟妊娠期孕激素水平,发现孕激素也可促进病毒复制,模拟感染HEV孕妇晚期血清的孕激素(2000ng/mL)可显著促进HEV的复制。因此,高雌激素、孕激素水平对HEV复制起促进作用。(3)雌激素信号通路与HEV复制的相关性为探究HEV对雌激素信号通路的调控机制,本文利用不同血清培养A549细胞,发现孕妇血清可以诱导雌激素受体的表达,然而HEV感染后会下调雌激素受体的表达。在雌激素信号通路中PI3K/Akt/mTOR信号通路也起到关键作用,利用PI3K抑制剂与mTOR抑制剂,可以促进病毒复制,补充高雌激素、孕激素的孕妇晚期血清,发现该促进效应增强。(4)HEV感染对孕鼠的影响为研究HEV感染对孕鼠妊娠的影响,建立HEV感染Balb/C孕鼠动物模型。本研究发现猪HEV可以感染Balb/C孕鼠,导致孕鼠91.7%的流产率。HEV感染使孕鼠雌激素、孕激素显著升高。HEV可以在孕鼠的肝脏、子宫中大量复制,抑制子宫雌激素受体的表达,调控细胞因子IL-12、IL-10产生。选取临床血清样本验证细胞因子IL-12、IL-10的表达情况。孕妇感染组血清中IL-12表达增加,IL-12/IL-10比值上调,妊娠期Th1型免疫增强。该结果与HEV感染孕鼠后IL-12、IL-10的表达结果一致。体外实验中,利用孕妇晚期血清培养A549细胞,感染HEV后,相比胎牛血清组、健康人血清组,孕妇晚期血清组在感染12小时INF-α表达受到抑制,在感染早期显著抑制INF-β的表达。通过本文研究结果表明孕妇晚期血清对HEV复制具有促进作用,高雌激素、孕激素促进HEV复制,并且进一步鉴定了 PI3K/Akt/mTOR信号通路在其中发挥重要作用,通过阻断该信号通路都大大促进了 HEV的复制。在体内实验证实HEV感染使孕鼠雌激素、孕激素显著升高,可调节免疫应答,HEV感染孕鼠后IL-12/IL-10比值上调。该结果为进一步深入研究HEV导致孕妇死亡率升高的致病机制提供了有力的理论依据。