【摘 要】
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J亚群禽白血病是由逆转录病毒引起的肿瘤性疾病,尚无药物和疫苗加以防控。家禽发病后由于根除成本和肿瘤导致的生产力下降,对全球家禽业造成了很大的经济损失。IFN-λ为新型干扰素,具有与Ⅰ型干扰素相似的抗病毒和抗肿瘤活性。通过原核表达IFN-λ研究其对ALV-J复制的作用,为预防和治疗J亚群禽白血病奠定了基础。将IFN-λ基因连入pET-32a原核表达载体构建重组质粒,进行双酶切验证。以最佳表达时间诱导
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J亚群禽白血病是由逆转录病毒引起的肿瘤性疾病,尚无药物和疫苗加以防控。家禽发病后由于根除成本和肿瘤导致的生产力下降,对全球家禽业造成了很大的经济损失。IFN-λ为新型干扰素,具有与Ⅰ型干扰素相似的抗病毒和抗肿瘤活性。通过原核表达IFN-λ研究其对ALV-J复制的作用,为预防和治疗J亚群禽白血病奠定了基础。将IFN-λ基因连入pET-32a原核表达载体构建重组质粒,进行双酶切验证。以最佳表达时间诱导IFN-λ蛋白表达,经蛋白纯化复性,用Western Blot验证。使用ELISA和荧光定量PCR法,检测单独使用IFN-λ和联合IFN-α在DF-1细胞上抑制ALV-J复制的作用。用IFN-λ诱导DF-1细胞,检测对ISGs和Ⅰ型干扰素表达的影响。单独使用IFN-λ时,终浓度在5000ng/mL时病毒相对表达量下降了52%(P<0.001),呈剂量依赖性抑制ALV-J的复制。在10ng/mL浓度下,联合使用IFN-α和IFN-λ比单独使用IFN-λ病毒相对表达量下降21%(P<0.01);在100ng/mL浓度下,联合使用比单独使用IFN-λ病毒相对表达量下降32%(P<0.001),说明IFN-α与IFN-λ有较为明显的协同作用。IFN-λ诱导细胞后,RSAD、ISG15、MX2、IFIT3、OASL和ISG12-2等六个基因表达显著上调,在12h时表达量最高;IFN-α表达量上调2倍,IFN-β表达量上调4.3倍,并在12h表达量最高。综上,原核表达IFN-λ在DF-1细胞上能抑制ALV-J的复制。联合使用IFN-α和IFN-λ的效果抑制更强。IFN-λ在12h诱导ISGs和Ⅰ型干扰素的表达量最高。
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