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乳酸菌(Lactic acid bacteria)是人们公认的食品级微生物。其被广泛应用于食品生产、医学工程、家畜养殖和发酵产业等。微生物制剂属于活性益生菌产品,能够改善生物体内生态平衡,提升主体的健康水准。本实验选择基因工程的方法来构建一种能够过量表达脂肪酶的乳酸杆菌工程菌W1/p MG36e-lipase-nis I。这种乳酸菌不包含抗生素等选择性标记标记,完全符合食品级别安全规范。实验扩增脂肪酶基因(lipase)是以植物乳酸杆菌W1基因组为模板,在质粒p ET30a中插入该脂肪酶基因(lipase),共同构建得到大肠杆菌表达载体p ET30a-lipase,再用购买的含有乳链菌肽抗性基因(nis I)的质粒p ET30a为模板进行nis I扩增,并将该基因插入到表达载体p MG36e-lipase中,将红霉素标记替换掉,成功得到乳酸菌表达载体p MG36e-lipase-nis I,运用电转化法转化将其转化到W1中,进一步构建出菌株W1/p MG36e-lipase-nis I,检测其在Nisin环境中生存及表达能力。结果表明,W1/p MG36e-lipase-nis I在乳链菌肽环境中生长发育良好,且W1具有良好的脂肪酶表达稳定性。通过对比脂肪酶分解甘油三酯产出甘油的量,得出该菌株可以过量表达脂肪酶。在相同条件下,含有甘油三酯的培养基中加入10%的植物乳酸杆菌菌株,培养4小时后得出结论为,重组菌表达的脂肪酶是普通菌株表达量的三倍以上。其次,用化转法将表达载体转入到BL21(E.coli BL21)中,让脂肪酶基因(lipase)在大肠杆菌中完成异源表达,用来研究此种脂肪酶的酶学性质,得出结论,当p H=8时,脂肪酶酶活活性达到最高,高达96.70μ/m L,当作用温度为40℃时,脂肪酶酶活活性达到最高,可达110.00μ/m L。该脂肪酶具有很强的酶学稳定性,甚至在极端p H=2时,脂肪酶活性依然高于38.69μ/m L,酶学性质仍保持在40%左右,即使温度为60℃时,其酶活力可以保持在20%以上,为21.50μ/m L。