【摘 要】
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本文从转化受体、转化方法、报告基因、再生途径、筛选方法等方面对裙带菜的遗传转化进行了研究。首先,分离并建立了裙带菜雌雄配子体的无性繁殖系,进行了裙带菜的不同再生途径的研究。进行裙带菜配子体孤雌生殖、孤雄生殖和雌雄受精的再生途径实验,结果没有得到孤雄生殖的裙带菜,孤雌生殖的效率低、时间长且发育不正常,雌雄受精的再生途径一个月左右90%以上的雌配子体都正常萌发成幼孢子体。确定在裙带菜遗传转化模型中采用
【出 处】
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中国科学院大学(中国科学院海洋研究所)
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本文从转化受体、转化方法、报告基因、再生途径、筛选方法等方面对裙带菜的遗传转化进行了研究。首先,分离并建立了裙带菜雌雄配子体的无性繁殖系,进行了裙带菜的不同再生途径的研究。进行裙带菜配子体孤雌生殖、孤雄生殖和雌雄受精的再生途径实验,结果没有得到孤雄生殖的裙带菜,孤雌生殖的效率低、时间长且发育不正常,雌雄受精的再生途径一个月左右90%以上的雌配子体都正常萌发成幼孢子体。确定在裙带菜遗传转化模型中采用雌雄受精的再生途径。 进行了基因枪法对裙带菜的组织块的转化,获得了SV40启动子驱动下的 LacZ 基因在裙带菜的假根、叶片、孢子囊中的瞬间表达,提示基因枪法是有效的裙带菜的遗传转化的方法,SV40启动子在裙带菜中没有组织表达特异性;进一步利用该基因转化裙带菜雄配子体,转化后加入雌配子体进行受精,经培养半年左右,组织化学染色法在雄配子体和幼孢子体中检测到了LacZ 基因的表达,雄配子体球约有30%有大量蓝色细胞;幼孢子体中有5%左右不同部位染有蓝色,面积从0.1%到60%不等,提取DNA,用特异性PCR引物扩增得到与阳性对照一致的特异条带,空白对照和阴性对照没有相应条带,进行PCR-Southern印迹杂交,得到了阳性结果,从分子水平证明了 LacZ 基因在裙带菜中实现了稳定表达。,为了解决转基因裙带菜的筛选问题,进行了裙带菜幼孢子体对不同筛选压力的敏感性实验,包括抗生素类的青霉素G、卡那霉素、G418、硫酸链霉素、盐酸洁霉素、Zeocin、氯霉素、潮霉素,除草剂类的Basta,氨甲喋呤类的氨甲喋呤, 结果显示裙带菜幼孢子体对氯霉素、潮霉素敏感,对Basta非常敏感。 本文初步建立了以雌雄配子体为受体,以基因枪法为转化方法,以SV40启动子为驱动元件,以雌雄受精为再生途径,以氯霉素、潮霉素或basta为筛选压力的裙带菜遗传转化模型。
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