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史密斯桉(Eucalyptus smithii)又名谷桉,属桃金娘科桉树属植物,原产澳大利亚新南威尔士南部和维多利亚东部。目前,史密斯桉种苗供不应求,主要通过种子繁殖,种子来源全靠进口,价格昂贵,每千克纯种子价值10.0万元,带杂花的种子每千克售价2.0万元左右。本课题拟通过组织培养的方式快速繁殖解决史密斯桉的种苗问题,并通过筛选培养基和控制培养条件,试图找到适合史密斯桉不定芽诱导、增殖及生根的适宜培养基和培养条件。
本论文通过组织培养方法,利用两年生史密斯桉植株幼嫩的茎段为外植体,筛选出适宜其诱导分化的培养基及激素配方以及继代增殖配方,为有效的提高继代系数以及减轻褐化、玻璃化奠定基础。试验方差和极差分析统计结果表明:
(1)史密斯桉幼嫩茎段较适宜做为组织培养材料,其诱导分化率能达到80%以上;
(2)诱导不定芽以MS为基本培养基,6-BA、KT、NAA、IBA、IAA五种激素,单独使用和配合使用,均能诱导不定芽产生。不定芽诱导的适宜培养基为:MS+6-BA0.5 mg/L+NAA0.05 mg/L+IBA0.1 mg/L+3%蔗糖+琼脂6g/L,且分化率较高,诱导率达85%;
(3)继代培养时对大量元素、蔗糖浓度和pH值进行试验,结果以MS培养基中所含的大量元素微量元素不变、3%蔗糖浓度和pH5.8效果最好。25d继代一次,增殖倍数达6.5。不同浓度配比的生长素和细胞分裂素对芽体增殖会产生不同的影响。具体表现为:6-BA和NAA组中6-BA0.5mg/L+NAA0.1 mg/L的增殖系数最高,为7.25;6-BA.和IBA组中,6-BA0.5mg/L+IBA0.1mg/L的增殖系数最高,为6.56;6-BA和IAA组合中,6-BA0.5mg/L+IAA0.2mg/L的增殖系数最高,为7.05;细胞分裂素为6-BA0.5mg/L时,在NAA、IBA和IAA三种细胞生长素中,以NAA最为适宜。6-BA、NAA和KT组合中,6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L的增殖系数最高,为7.51。此外,不同细胞分裂素对芽体增殖的影响也不同,6-BA的增殖效果明显优于KT。因此,芽体增殖的最佳培养基激素为6-BA0.5mg/L+NAA0.2 mg/L+GA30.2mg/L。诱导增殖的细胞分裂素6-BA和KT,以6-BA更好。通过本次试验只能初步得出20mg/LVc+2%PVP+0.5%活性炭可以起到有效的缓解其褐化程度的结论;在组织培养中通过降低培养温度、适当提高琼脂的浓度(7g/L)、延长光照时间可以起到缓解玻璃化的作用:
(4)在生根培养阶段,本试验以1/2MS为基本培养基,附加不同浓度不同种类的激素诱导生根。结果表明:在IBA、NAA和IAA不同浓度的处理中,IBA对生根的诱导影响较大,生根率达72%;生根粉在史密斯桉生根诱导中能提高生根率。1/2MS+IBA0.5mg/L+NAA0.5mg/L+ABT0.5mg/L时的诱导率最高,生根率达80%;7天开始生根,平均根数在3根以上,平均根长在2.0cm左右。生根前期温度不太高,否则导致苗徒长,影响生根率和移栽效果;
(5)炼苗移栽时,史密斯桉较适宜的炼苗天数为10天。移栽基质采用土沙混合(土:沙=1:3体积比)或营养土和珍珠岩(2:1体积比)混合,无污染且生根好的小苗,30d后成活率仍在80%以上。把已长根的史密斯桉试管苗移入温室,遮光70%,进行炼苗,从瓶中取出洗净培养基,移植在筛选好的基质中。在自然光照条件下搭建覆盖75%的遮阳网和小拱棚内进行移栽驯化,在高温干燥的天气条件下可以盖薄膜保湿,一天浇水次数在2次以上。