论文部分内容阅读
目的：研究华蟾素注射液对人肝癌HepG-2细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响,初步探讨可能的机制。方法：以不同浓度的华蟾素注射液作用于人肝癌HepG-2细胞,采用噻唑蓝还原法(MTT)观察华蟾素注射液对HepG-2细胞增殖的影响；采用倒置显微镜观察细胞形态学的变化；采用原位缺口末端标记法(TUNEL)及AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡情况：采用流式细胞术(FCM)检测HepG-2细胞周期分布；采用免疫组化法检测凋亡相关基因Bcl-2/Bax表达的变化；采用逆转录-多聚酶链反应技术(RT-PCR)检测凋亡周期蛋白CyclinA.CDK2 mRNA及TOPOⅠ.ⅡmRNA水平表达的影响；采用比色定量法检测HepG-2细胞CyclinA和CDK2活性的变化。结果：1、≥0.006μg/ml的华蟾素注射液对HepG-2细胞增殖具有抑制作用,其抑制效应呈时间和浓度依赖性。2、华蟾素注射液作用HepG-2细胞后可见凋亡形态学变化,部分细胞体积变小,染色质浓缩边集,呈时间和浓度依赖性(P<0.05)。3、华蟾素注射液作用HepG-2细胞后,细胞被阻滞在S期,呈时间依赖性(P<0.05)。4、华蟾素注射液抑制HepG-2细胞凋亡相关基因Bcl-2表达,促进Bax表达,呈浓度依赖性。5、华蟾素注射液抑制HepG-2细胞CDK2、CyclinA、TOPOⅠ、TOPOⅡmRNA水平表达,呈浓度依赖性。6.华蟾素注射液可使HepG-2细胞CyclinA、CDK2活性降低,呈浓度依赖性(P<0.05)。结论：华蟾素注射液能够抑制人肝癌HepG-2细胞增殖,诱导其凋亡,将细胞阻滞于S期,下调CDK2、CyclinA、TOPOⅠ、TOPOⅡmRNA,抑制CDK2/CyclinA活性,影响Bcl-2、Bax表达,可能是华蟾素注射液实现药效机制之一。