开心散对Aβ<,25-35>诱导SK-N-SH细胞损伤的保护作用及机制的研究

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[目的]:目前普遍认为,Alzheimer病(AD)患者脑中β-淀粉样肽(Aβ)的异常增加与沉积是启动AD神经退变不可逆病理发展过程的核心事件。而我国传统中医药复古方开心散是许多经典的益智类古方之一,经长期临床实践,证实有良好的益智作用。为了进一步探讨开心散在防治AD方面的分子机制,我们培养了具有神经元特性的人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞(做为神经元的细胞模型),运用中药血清药理学方法,观察开心散药物血清对AD病理性神经毒性物质Aβ25-35诱导的神经细胞损伤模型的保护作用,并探讨其分子机制,为研究筛选对Alzheimer病(AD)等神经退行性疾病的有治疗作用的传统药物寻求实验证据。[方法]:(1)提取含开心散的药物血清;(2)Aβ损伤细胞模型的制备:MTT法测细胞存活率,确定适当损伤细胞条件(Aβ25-3515μM,作用24小时);(3)各种指标的检测:通过细胞存活率、细胞内SOD酶活性、DNA片断化的测定及流式细胞凋亡率,分析观察Aβ对细胞的损伤作用及开心散对Aβ诱导的细胞损伤的保护作用;(4)RT-PCR法检测AD相关基因APP和NEPmRNA表达的变化;(5)Western-blot法检测APP蛋白表达的变化。[结果]:MTT实验显示Aβ25-35处理后,SK-N-SH细胞生存率下降约40%,而含有开心散的药物血清能提高细胞内SOD的活性(P<0.01),降低细胞的凋亡率,降低APP基因的表达减少APP蛋白的生成,并提高NEP基因的表达,从而提高细胞的存活率。[结论]:一定剂量
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