背景:在急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）中,既往认为细胞遗传学是预测疾病缓解率、复发率及总体生存率最重要的指标,近年来随着高通量测序,RNA测序以及全基因组测序等新技术的发展,分子生物学指标对于预后的意义得到不断的认识。在此基础上,我们对一例多次复发的正常核型AML患者进行了 RNA测序,发现并鉴定了 CTCF-ETO2和ETO2-CTCF新融合基因。ETO2（Eight Twenty-One 2）作为转录共抑制因子可通过调节细胞命运基因及与白血病干细胞转化和复发相关的基因表达来影响AML患者的预后。CTCF（CCCTC-binding factor）则作为转录因子参与许多细胞过程,包括转录调节、绝缘子活性、V（D）J重组和染色质结构的调节。因此,新融合基因在白血病的发生发展中可能扮演着重要角色。目的:回顾性描述该患者的临床特征,研究新融合基因CTCF-ETO2和ETO2-CTCF在鼠32D细胞系和人AML细胞系中生物学功能及靶向治疗。方法:1.回顾性描述苏州大学第一附属医院血液科2017年收治的1例多次复发的正常核型AML患者的临床及实验室特征;2.通过RNAseq发现并运用RT-PCR及Sanger测序验证新融合基因ETO2-CTCF和CTCF-ETO2,构建融合基因的pcDNA3.1表达载体和Venus表达载体;3.进行免疫荧光实验以明确ETO2-CTCF和CTCF-ETO2融合蛋白的亚细胞定位。在新融合基因的稳转细胞株中,CCK8（cell counting kit-8）检测细胞增殖表型,流式（Annexin V和7-AAD）检测细胞凋亡表型,Q-PCR检测红系基因的表达,Western Blot检测下游信号通路蛋白表达水平,找到异常活化分子及其靶向药物。结果:1.患者临床和实验室特征患者青年女性,初诊时WBC明显增高（132×109/L）,骨髓核型分析为46,XX[20],明确诊断为“急性髓系白血病M2型”。诊疗过程中该患者共出现3次复发,第1次髓内复发伴有乳腺浸润,第2次复发后行挽救性父供女半相合异基因造血干细胞移植,第3次移植后复发导致患者死亡,预后极差,需要探讨潜在的致病机制。2.CTCF-ETO2和ETO2-CTCF融合基因的克隆通过RNAseq发现新融合基因ETO2-CTCF和CTCF-ETO2,运用RT-PCR及Sanger测序进一步验证。CTCF的第5号外显子与ETO2的第2号外显子融合形成CTCF-ETO2融合转录本,而ETO2-CTCF融合转录本由ETO2第1号外显子与CTCF第6号外显子拼接而成。利用基因合成技术成功克隆了 CTCF-ETO2及ETO2-CTCF全长,并构建了融合基因相关的pcDNA3.1及Venus表达载体。3.CTCF-ETO2和ETO2-CTCF融合基因的功能研究免疫荧光显示CTCF-ETO2和ETO2-CTCF融合蛋白都存在于细胞核内。体外研究显示在32D稳转细胞株中,融合基因组的增殖能力明显高于空载组,mIL-3撤退时仍存在增殖优势。Western Blot检测到融合基因组P-STAT3蛋白水平高于对照组。融合基因组与空载组的凋亡未见明显差异。C188-9（STAT3抑制剂）可以抑制融合基因组的细胞增殖表型,同时有促进凋亡的趋势。Q-PCR及流式提示CTCF-ETO2组红系抗原表达下调。此外,在Kasumi-1稳转细胞株中,ETO2-CTCF通过上调P-STAT3表达水平介导的增殖优势也可被C188-9抑制。结论:1.全转录组测序对发现白血病的新致病基因有着重要价值;2.新融合基因CTCF-ETO2和ETO2-CTCF均可通过激活JAK/STAT3信号通路促进细胞增殖,为ETO2融合基因阳性白血病发生发展的机制之一;3.STAT3选择性抑制剂C188-9可抑制新融合基因CTCF-ETO2和ETO2-CTCF促进的细胞增殖,可作为ETO2相关融合基因阳性患者潜在靶向治疗药物。