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第一部分 sirtuin家族在异基因造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病中的作用目的探究sirtuin家族在异基因造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病中的作用。方法本课题首先在体外进行混合淋巴细胞培养（Mixed Lymphocyte Reaction,MLR）,将Balb/C小鼠去除T细胞的脾脏细胞与C57BL/6小鼠的T细胞混合培养,使用细胞增殖染料CTV标记效应细胞,按0μg/ml、1μg/ml、1 0μg/ml的浓度梯度分别加入sirtuin家族抑制剂/活化剂进行药物干预,共培养5天后通过流式细胞术检测T细胞活化及增殖情况。使用ELISA试剂盒测定混合淋巴细胞培养上清中的IFN-γ浓度。使用CD3/CD28共刺激C57BL/6小鼠的T细胞,并使用细胞增殖染料CTV对T细胞进行标记,按0μg/ml、1μg/ml、10μg/ml的浓度梯度分别加入sirtuin家族抑制剂/活化剂进行药物干预,48小时后流式细胞术检测T细胞增殖情况。建立经典的主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex,MHC）不相合的移植模型（C57BL/6→Balb/C）,受体Balb/C小鼠接受全身致死性剂量X-ray照射（650 cGy）后输注C57BL/6小鼠来源的1×107个骨髓细胞和4×106个脾细胞。从移植第0天起予以为期14天的腹腔注射2mg/kg/d、200μl/mice的SIRT2、SIRT6、SIRT7活化剂/抑制剂的药物干预,采用溶剂1×PBS作为对照组。移植后监测受体小鼠的生存和体重变化,记录aGVHD评分。移植后14天取小鼠脾脏细胞,采用流式细胞术检测移植小鼠的免疫表型。结果（1）在MLR中,与未予药物干预相比,药物抑制SIRT1、SIRT2、SIRT7组的T细胞增殖明显减少,抑制SIRT3表达后T细胞增殖无明显变化,抑制SIRT5后T细胞的增殖增加,SIRT6活化剂可以抑制T细胞的增殖。（2）与未予药物干预的MLR上清中IFN-γ浓度相比,药物抑制SIRT2、SIRT7的MLR上清中IFN-γ的浓度减少,活化SIRT6的IFN-γ的浓度减少,干预SIRT5无明显差异。（3）使用CD3/CD28共刺激T细胞,与未予药物干预相比,药物抑制SIRT2、SIRT7可以抑制T细胞增殖,抑制SIRT5后T细胞增殖无显著差异,活化SIRT6后T细胞增殖降低。（4）在经典移植小鼠模型中,与对照组小鼠比,SIRT2组小鼠生存周期更长且急性移植物抗宿主病（acute graft-versus-host disease,aGVHD）症状较轻,SIRT6组小鼠的生存明显延长,且明显延缓了 aGVHD症状,SIRT7组生存及aGVHD情况未见明显差异。（5）异基因移植后小鼠免疫表型结果显示,上调SIRT6表达不影响Treg细胞,但抑制了 CD4+T细胞的活化,降低了效应CD4+T细胞比例,并抑制了CD4+T细胞中IFN-γ的分泌。结论体外相关实验表明SIRT2、SIRT6、SIRT7影响同种异体T细胞反应。SIRT6高表达对小鼠异基因造血干细胞移植后aGVHD具有抑制作用,其机制可能是通过影响移植后T细胞的活化及其炎症因子IFN-γ的分泌从而抑制aGVHD。第二部分sirtuin家族在急性移植物抗宿主病患者中的表达及临床意义目的探究sirtuin家族在异基因造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病患者中的表达水平及临床意义。方法收集86例2015年至2016年在苏州大学附属第一医院接受异基因造血干细胞移植后发生aGVHD患者移植前、移植第14天以及28天时外周血单个核细胞样本,使用Real-time qPCR检测样本中sirtuin家族的相对表达量,根据患者是否发生3-4级aGVHD以及是否发生肠道aGVHD将其分别分为两组,分析两组间患者sirtuin家族的表达水平,并根据表达水平差异进一步进行ROC曲线及曲线下面积（AUC）分析。随后我们以SIRT6表达水平的平均值作为临界值分别将发生3-4级aGVHD、肠道aGVHD患者分为高、低表达SIRT6两组,分析两组间5年总体生存时间（overall survival,OS）、无复发生存时间（relapes-free survival,RFS）以及非复发死亡率（non-relapes mortality,NRM）。结果（1）造血干细胞移植患者的sirtuins基因相对表达量在移植后28天时较移植前明显增高。（2）移植后14天时,发生1-2级aGVHD患者SIRT6相对表达量较发生3-4级 aGVHD 患者的表达量高（0.0289±0.0236 vs 0.0192±0.0134;P=0.0436）。移植28天时1-2级aGVHD患者SIRT6基因相对表达量也较发生3-4级aGVHD患者的表达量高（0.0418±0.0282 vs 0.0298±0.0158;P=0.033）,且较 14 天时其表达量差异更明显。移植28天时肠道aGVHD患者SIRT6相对表达量较未发生肠道GVHD 患者的表达量低（0.0296±0.0173 vs 0.0420±0.0273;P=0.0273）。（3）在发生肠道aGVHD患者中,移植28天时ROC曲线下面积为0.653（P=0.024,95%CI:0.528-0.779）。在 3-4 级发生肠道 aGVHD 的患者中,移植14天时ROC曲线下面积为0.652（P=0.036,95%CI:0.525-0.780）,在移植28天时 ROC 曲线下面积为 0.678（P=0.013,95%CI:0.550-0.807）。（4）在3-4级aGVHD患者中,高、低水平SIRT6患者5年OS、RFS以及NRM无显著差异。（5）在肠道aGVHD患者中,移植28天时高表达SIRT6组5年RFS为85.7%,低表达SIRT6组5年RFS为41.7%,差异有统计学意义（P=0.027）。结论SIRT6的表达水平可以提示3-4级aGVHD尤其是肠道aGVHD的发生,并且对肠道aGVHD的预后具有一定的提示意义。