香合欢硬实破除及组织培养研究

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香合欢(Albizia odoratissima(L.f.)Benth)树形优美,树干通直,抗逆性强,木材美观,具有改良土壤的作用,有较高的景观价值、经济价值和生态价值。但由于其分布较少,且种子硬实度较高,无法满足推广、利用的需求。因此,本文以香合欢为研究对象,进行了硬实破除和组织培养研究。为今后香合欢的种子繁殖与组培快繁提供理论基础。硬实破除主要以热水、浓硫酸两种方式进行处理。组织培养则以无菌苗嫩芽及半年生小苗幼嫩茎段为材料,进行灭菌、初代培养、继代培养、壮苗、生根等方面的研究。主要研究结果如下:1.种皮完整性对种子吸水及萌发的影响:未处理的香合欢种子经过常温水(25℃)26h的浸泡后,种子质量几乎没有变化,而经过磨砂和针刺处理的种子在浸泡过程中质量显著增加。将上述种子进行发芽试验,发现针刺处理的种子发芽率为92.22%,磨砂处理的种子发芽率为94.44%,未处理的种子发芽率仅为12.22%。由此可知,香合欢种子种皮具有一定的透水性障碍,这是造成香合欢种子休眠,发芽率较低的主要原因之一。2.硬实破除方式:热水处理最佳方案为85℃热水浸种,自然冷却并放置24h。此时发芽率、发芽势、发芽指数分别为80.00%、95.56%和16.17;浓硫酸处理最佳时间为20min,香合欢发芽率和发芽势均达到100%,发芽指数为17.37。但浓硫酸处理会对香合欢幼苗的过氧化物酶活性造成不利影响。3.温度对种子发芽的影响:25℃恒温为香合欢种子最适发芽温度。该环境下,香合欢种子发芽率、发芽势和发芽指数分别为95.56%、80.00%、16.17。4.表面灭菌:香合欢种子在生长发育过程中有果皮保护,且种皮表面光滑,细菌附着较少。并且在灭菌前,种子经过85℃热水处理,起到灭菌效果。因此,种子用75%乙醇浸泡30s后,再用6%次氯酸钠溶液或0.1%氯化汞溶液进行灭菌5~20min均能取得较好效果。最高污染率仅为4.44%。香合欢幼嫩茎段最佳灭菌方式为75%乙醇浸泡30s后,再用0.1%氯化汞溶液灭菌2min。此时污染率最低,为2.22%,褐化率较低,为6.67%,成活率最高,为91.11%。5.初代培养:香合欢嫩芽最佳丛芽诱导培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.3mg/L+30g/L蔗糖+7g/L琼脂。在该条件下,组培苗长势较好,丛生芽诱导率为94.44%,增殖系数为4.57。在此过程中,不定芽的数量变化基本呈匀速增长趋势。研究发现,丛芽的过氧化物酶活性与培养基中的氮含量密切相关。在氮含量高的培养基中,组培苗的过氧化物酶活性也较高。此外,丛芽的叶绿素含量受到培养基中氮元素含量与外植体生长速度的共同影响。香合欢幼嫩茎段腋芽生长最佳培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L,该处理下,腋芽萌动生长率为47.46%。与香合欢幼嫩茎段相比,香合欢嫩芽具有增殖系数大、扩繁速度快等优势,所以,嫩芽丛芽诱导是更符合香合欢组培快繁要求的初代培养模式。6.继代增殖培养:香合欢最佳继代培养基为MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.2mg/L+30g/L蔗糖+7g/L琼脂,最适合的增殖方式为分段为主,分株为辅。培养过程中,前14d,不定芽的株高增长缓慢,后14d,不定芽的株高增长迅速。7.壮苗培养:香合欢最佳壮苗培养基为WPM+6-BA0.1mg/L+NAA0.5mg/L。该处理下,组培苗长势健壮,叶色深绿,株高可达到4.35cm。8.生根培养:香合欢最佳生根培养基配方为1/4MS+IBA0.5mg/L+NAA1.0mg/L,具体表现为外植体可直接诱导出不定根或基部愈伤组织较少,生根率为30.95%,平均根长、平均根数均表现较好,且根系上带有侧根,适于移栽。
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