【摘 要】
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报告一 人截短型重组可溶性TRAIL在大肠杆菌的表达和杀肿瘤细胞活性的研究;该研究首先从真核表达载体pSectagA-TRAIL中,通过PCR方法扩增得到长约510bp的编码170个氨基酸的TRA
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报告一 人截短型重组可溶性TRAIL<,170>在大肠杆菌的表达和杀肿瘤细胞活性的研究;该研究首先从真核表达载体pSectagA-TRAIL中,通过PCR方法扩增得到长约510bp的编码170个氨基酸的TRAIL基因片段,继而我们成功地构建了pGEX-4T-sTRAIL-170原核表达载体,实现了在大肠杆菌中的高效表达和纯化.生物学活性表明,这种截短型可溶性TRAIL-170蛋白能够显著地诱导Jurkat细胞和MCF7细胞的凋亡,并呈现时间依赖性和浓度依赖性关系.与国际上通用的TRAIL95-281蛋白相比,截短型可溶性TRAIL-170具有分子量小、杀细胞活性高的特点.动物实验进一步表明,截短型可溶性TRAIL-170能有效抑制肿瘤细胞的生长,表现为体积少,重量轻.凋亡信号转导的研究证明,截短型可溶性TRAIL-170蛋白是通过激活上游的Caspase-8和下游的Caspase-3而导致细胞凋亡的,这与死亡受体介导的信号转导通路是一致的.报告二 Bcl-2/Bcl-xL 小分子抑制剂棉酚的筛选以及杀肿瘤细胞活性的机理研究;该研究旨在通过建立起来的分子和细胞凋亡的技术平台，从中药库中发现具有细胞通透性、非免疫原性的小分子化合物，能够抑制肿瘤细胞Bcl-2/Bcl-xL的活性，诱导肿瘤细胞凋亡，从而达到治疗肿瘤的目的.我们首先建立了以Bid-BH3为“Tracer”、Bcl-xL为靶标的竞争性荧光结合试验的分子筛选模型，和以抑制Bcl-2高表达的肿瘤细胞增殖的细胞水平筛选模型.考虑到开发的需要，筛选到的小分子化合物对正常组织和细胞不应该产生细胞毒性，通过一系列的初筛和复筛，最终我们从8000多个化合物（包括化学合成的和天然小分子化合物）中将棉酚筛选出来.综合上述研究结果，我们不难看出，棉酚能通过线粒体途径诱导细胞凋亡，其作用的药物靶标是线粒体外膜Bcl-2/Bcl-xL蛋白，这一现象的发现为进一步理解和阐明棉酚诱导凋亡的机制提供了新的思路，为棉酚作为抗肿瘤药物的临床应用奠定了良好基础.
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