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中药治疗类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)历史悠久,类叶牡丹是其中的代表药物之一,但其有效部位在体内的变化规律尚未明确。本课题建立类叶牡丹有效提取部位的4种待测组分(木兰花碱、葳严仙皂苷C、常春藤皂苷元及齐墩果酸)的UPLC-MS/MS体外研究方法,并成功应用于类叶牡丹有效提取部位在大鼠体内的药代动力学研究,为类叶牡丹的进一步深入研究奠定基础。论文主要研究内容及结果:1.建立并验证类叶牡丹有效部位中4种待测组分在大鼠血浆中的含量测定方法本研究采用超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用技术(UPLC-MS/MS)建立同时检测类叶牡丹有效部位中4种待测组分在大鼠血浆中含量测定方法。应用 ACQUITY HSS T3(50mm × 2.1mm i.d.,1.7μm),在90%乙腈-水等度洗脱程序下,流速为0.2mL/min对4种待测组分进行分离,运行时间仅为4min,木兰花碱、葳严仙皂苷C、常春藤皂苷元、齐墩果酸和地高辛(I.S.)的保留时间分别为0.71min、0.79min、1.32min、2.31min和0.73min。离子源选择电喷雾(ESI),除木兰花碱采用正离子模式外,其他组分采用负离子模式,优化质谱仪各项参数,采用多反应监测(MRM)方式进行检测。结果表明,建立的检测方法专属性良好,4种待测组分的线性关系良好(r>0.9926);日内及日间精密度(相对标准偏差)分别在1.57～10.48%和1.31～10.68%范围之间,日内及日间准确度(相对误差)分别在-2.24～9.90%和-1.97～11.17%范围之间;各组分的提取回收率及基质效应在80.80～93.06%和83.41～104.21%之间,内标化合物的提取回收率及基质效应为92.04%和94.27%;各待测组分的稀释效应99.42～102.03%;待测组分的血浆样品常温下放置4h及4℃下保存12h稳定性良好,经过3个冻融-冷冻循环后保持稳定,在-80℃下保存1个月,未出现明显的降解反应。该方法检测快速,操作简单,灵敏度高,选择性好,可以用于检测类叶牡丹有效部位的4种成分的血浆样品。2.类叶牡丹有效部位在正常大鼠体内药代动力学行为研究这部分研究中将建立的UPLC-MS/MS法成功应用于类叶牡丹有效部位的药代动力学研究中,给大鼠单次灌胃1.5g/kg类叶牡丹有效提取部位,观察4种待测组分在正常大鼠体内药代动力学行为。应用DAS2.0软件计算4种待测组分的药代动力学参数。结果发现,4种待测组分的主要动力学参数:(1)木兰花碱:符合一室模型,半衰期(t1/2)为(5.15±0.26)h,药峰浓度(Cmax)为(1941.69±24.83)μg/L,药峰时间(Tmax)为(4.00±0.00)h,表观分布容积(V)为(442.45±22.60)L/kg,清除率(CL)为(59.53±0.50)L/h/kg,曲线下面积(AUC0→T 和 AUC0→∞)分别为(24259.84±486.64)μg/L*h和(25464.07±502.08)μg/L*h,平均置留时间(MRT0→T 和 MRT0 →∞)为(8.00±0.07)h和(9.10±0.15)h;(2)葳严仙皂苷(C:符合二室模型,分布相半衰期(t1/2α)为(1.53±0.19)h,消除相半衰期(t1/2β)为(17.67±6.59)h,药峰浓度(Cmax)为(1580.20±70.97)μg/L,药峰时间(Tmax)为(2.33±0.52)h,表观分布容积(V)为(488.58±57.37)L/kg,清除率(CL)为(116.96±3.59)L/h/kg,曲线下面积(AUC0→T和 AUC0→∞)为(11375.68±409.27)μg/L*h和(13196.34±350.86)μg/L*h,平均置留时间(MRT0→T和 MRT0→∞)为(6.94±0.09)h和(11.13±0.93)h;(3)常春藤皂苷元:符合一室模型,半衰期(t1/2)为(2.87±0.20)h,药峰浓度(Cmax)为(834.56±26.72)μg/L,药峰时间(Tmax)为(6.00±0.00)h,表观分布容积(V)为(2239.31±477.10)L/kg,清除率(CL)为(537.05±82.72)L/h/kg,曲线下面积(AUC0→T和AUC0→∞)分别为(4651.65±165.62)μg/L*h 和(4652.21±165.99)μg/L*h,平均置留时间(MRT0→T和 MRTo→∞)为(6.13±0.14)h 和(6.20±0.15)h;(4)齐墩果酸:符合二室模型,分布相半衰期(t1/2α)为(1.61±0.17)h,消除相半衰期(t1/2β)为(65.63±9.02)h,药峰浓度(Cmax)为(782.25±40.69)μg/L,药峰时间(Tmax)为(0.75±0.00)h,表观分布容积(V)为(4376.01±650.24)L/kg,清除率(CL)为(1676.14±149.60)L/h/kg,曲线下面积(AUC0→T和 AUC0→∞)为(983.72±99.21)μg/L*h 和(1017.75±126.38)μg/L*h,平均置留时间(MRT0→T和 MRTo→∞)为(4.03±0.14)h和(5.32±0.71)h。不同的物质在体内的变化及规律不同,可能相互之间产生协同或拮抗作用。本研究中同时首次建立UPLC-MS/MS法同时检测4种组分的含量,并通过药动学理论研究其体内变化规律,上述研究内容为进一步阐明类叶牡丹的有效部位的药效物质和作用机制提供参考。