猪繁殖与呼吸障碍综合征(Porcine Reproductive and Respiration Syndrome,PRRS)是目前引起猪场繁殖障碍的主要疫病之一,PRRSV基因组中一共有6种结构蛋白基因,分别由ORF2、ORF3、ORF4、ORF5、ORF6和ORF7基因编码病毒的GP2、GP3、GP4、GP5、M蛋白和N蛋白,其中N蛋白为本病毒的优势结构蛋白,而且该蛋白具有良好的免疫原性和反应原性,为诊断PRRS的首选蛋白。本研究利用原核表达系统对PRRSV河南分离株Hn-1/06株N蛋白基因进行了高效可溶性表达,并用重组的N蛋白作为抗原,成功地建立了检测PRRSV血清抗体的N蛋白间接ELISA方法。本研究利用RT-PCR从PRRSV河南分离株Hn-1/06克隆得到了大小约501bp片段的N蛋白基因,并将扩增的基因片段克隆到PGEM-T-easy载体中进行测序。利用DNAStar软件进行序列分析,结果表明河南分离株Hn-1/06属于美洲型,同时将Hn-1/06株N基因的核苷酸序列和推导氨基酸序列与ATCC VR2332、LV、Resp、CH-1a、BJ-4、S1、CC-1、HB-1、JX0612、HUB1等分离株进行了同源性分析,Hn-1/06株与空间距离较近的HB-1、JX0612、HUB1同源性极高,核苷酸同源性能达到97%以上,推导氨基酸同源性达93.5%以上;而与空间距离较远的S1、CC-1同源性次之。这在一定程度上说明了PRRSV的同源性与空间距离密切相关,空间距离越近同源性越高;反之,空间距离越远同源性越小。根据PRRSV河南分离株Hn-1/06株N基因设计表达引物,扩增出两端带有EcoRⅠ和H indⅢ酶切位点的N蛋白基因,亚克隆到原核表达载体PET32a中构建了重组表达质粒PET32a-N,在IPTG的诱导下成功表达,获得了大小约为33KD的融合蛋白N-His,与预期结果相符;通过对表达条件进一步优化,获得了融合蛋白N-His的高效可溶性表达。经SDS-PAGE和Western blot分析,表达量约占细菌总蛋白量的29%。应用镍琼脂糖凝胶树脂层析柱纯化重组N-His融合蛋白,纯化的融合蛋白经SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定,目的蛋白纯度高达91%,并具有良好的免疫原活性。同时利用重组N-His融合蛋白作为包被杭原,通过优化各步反应条件,建立了可从猪血清中检测猪繁殖与呼吸综合征抗体的重组N蛋白间接ELISA方法。并将所建立的N-ELISA方法与国外进口的PRRS检测试剂盒IDEXX-ELISA对200份临床送检血清进行平行检测,二者阳性符合率为92.7%,阴性符合率为92.2%,总符合率达到92.5%,表明所建立的N-ELISA具有较高的特异性和敏感性。