辣椒叶片cDNA文库构建研究

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tongjingjj
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本研究利用从我省辣椒地方品种资源中筛选出的抗病品种为材料,在优化了其RNA提取方法的基础上,构建辣椒叶片响应UV辐射而表达的cDNA文库,主要结果如下: (1)以经过UV辐射处理后的辣椒叶片为研究材料,优化了辣椒RNA提取方法,在该方法下所提取的RNA质量,能够很好的满足构建文库的要求。 (2)利用MMLV反转录酶把总RNA中的mRNA反转录成cDNA,用特异引物进行LD-PCR扩增合成双链cDNA:用CHROMA SPIN-400Column对cDNA进行分级分离,去除小于500bp的cDNA片段:用带有粘性末端的双链cDNA与入TriplEx2载体连接,利用入噬菌体包装蛋白对合成的双链cDNA进行体外包装,包装产物侵染E.coli XL-Blue获得cDNA文库。该cDNA文库的滴度为1.191×106,克隆数为1.112×106,扩增后的滴度为1.532×1010,插入片段平均大小在1kb左右,蓝白斑筛选证实其重组率大于80%。同时,由于反转录过程中采用附加序列的方法使全长mRNA得到反转录,所以得到的cDNA是完整的,有利于各种基因的全长cDNA的获得。
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