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目的:研究文冠果壳苷对膀胱癌T24和5637细胞功能的影响,初步探讨其在膀胱癌中的抗肿瘤机制。方法:1.CCK-8法(Cell Counting Kit-8)检测不同浓度的文冠果壳苷作用于膀胱癌T24和5637细胞24h后细胞的增殖抑制;2.CCK-8法检测10μM的文冠果壳苷作用于膀胱癌T24和5637细胞不同时间后细胞的增殖抑制;3.流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测不同浓度的文冠果壳苷作用于膀胱癌T24和5637细胞24h后细胞的凋亡率;4.光学显微镜下观察不同浓度的文冠果壳苷作用于膀胱癌T24和5637细胞24h后细胞形态学变化;5.DAPI(4’,6-diamidino-2-phenylindole)染色法检测不同浓度的文冠果壳苷作用于膀胱癌T24和5637细胞24h后细胞核的形态学变化;6.实时定量PCR(quantitative real time PCR)检测不同浓度的文冠果壳苷作用于膀胱癌T24和5637细胞24h后Caspase-3,Bcl-2,P53基因表达量;7.蛋白免疫印迹(Western blot)法检测不同浓度的文冠果壳苷作用于膀胱癌T24和5637细胞24h后Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9,Bcl-2,Bcl-xL,Bax,P53,PI3K,p-PI3K,Akt,p-Akt蛋白表达量。结果:1.CCK-8法实验结果表明,文冠果壳苷可明显抑制膀胱癌T24和5637细胞增殖,并且随着药物浓度增加,细胞存活率逐渐降低,呈浓度依赖关系;24h IC50(Median Inhibitory Concentration)分别为8.39μM和10.77μM;2.10μM文冠果壳苷分别作用膀胱癌T24和5637细胞后,随着药物作用时间的延长,细胞存活率逐渐降低,呈现时间依赖关系。3.流式细胞仪检测0、6、8、10μM文冠果壳苷作用膀胱癌T24和5637细胞24h后,T24细胞凋亡率分别为(3.72±0.53)%、(18.97±1.24)%、(25.30±2.02)%、(38.97±0.76)%,差异有统计学意义,(P<0.05);5637细胞凋亡率分别为(2.82±0.44)%、(4.51±0.60)%、(13.60±1.11)%、(23.13±1.99)%,差异有统计学意义,(P<0.05);4.0、6、8、10μM文冠果壳苷作用膀胱癌T24和5637细胞24h后,光学显微镜下观察发现,随着文冠果壳苷浓度的增加,膀胱癌T24和5637细胞脱壁,变圆回缩,相邻细胞间距增大;5.0、6、8、10μM文冠果壳苷作用膀胱癌T24和5637细胞24h后,进行DAPI染色,荧光显微镜下观察发现,随着文冠果壳苷浓度的递增,细胞核形态改变,染色加深且出现凋亡小体;6.应用实时定量PCR检测0、6、8、10μM文冠果壳苷作用膀胱癌T24和5637细胞24h后,文冠果壳苷可浓度依赖性的升高Caspase-3,升高P53,降低Bcl-2基因表达水平,差异有统计学意义,(P<0.05);7.应用蛋白免疫印迹法检测0、6、8、10μM文冠果壳苷作用膀胱癌T24细胞和5637细胞24h后,结果表明,与对照组0μM比较,Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9,PI3K,Akt各组间无统计学差异。8和10μM文冠果壳苷作用T24细胞24h后,与对照组0μM比较,Bcl-2,Bcl-xL,p-PI3K,p-Akt的蛋白表达量均有明显下降,P53蛋白表达量明显升高,差异有统计学意义,(P<0.05)。6,8和10μM文冠果壳苷作用T24细胞24h后,Bax蛋白表达量均明显升高,差异有统计学意义,(P<0.05)。8和10μM文冠果壳苷作用5637细胞24h后,与对照组0μM比较,Bcl-2和Bcl-xL的蛋白表达量均有明显下降,差异有统计学意义,(P<0.05)。6,8和10μM文冠果壳苷作用5637细胞24h后,Bax蛋白表达量均明显升高,差异有统计学意义,(P<0.05)。10μM文冠果壳苷作用膀胱癌5637细胞24h后,与对照组比较,p-PI3K和p-Akt的蛋白表达量下降,P53蛋白表达量升高,差异有统计学意义,(P<0.05)。结论:1.文冠果壳苷能够抑制膀胱癌细胞的增殖;2.文冠果壳苷可通过抑制PI3K/Akt从而上调P53诱导膀胱癌细胞进行Bcl-2/Bax依赖的线粒体途径的细胞凋亡。3.文冠果壳苷可能是一个具有开发潜力的可用于膀胱癌治疗的活性化合物。