第一部分 猪IFNα高密度发酵研究 干扰素(Interferon，IFN)是一类重要的细胞因子，具种属特异性，在同种细胞上具有广谱的抗病毒、抗细胞增殖、免疫调节等多种生物活性。其中IFN-α／β是机体的第一抵御病毒体系。养猪业在我国畜牧业中占有举足轻重的地位，而目前各种猪病正越来越严重地影响着我国养猪业的发展。因此采用重组DNA技术生产猪α干扰素作为免疫增强剂和免疫治疗剂无疑有重要意义。 本研究从发酵时间，接种量，pH值，诱导剂量等方面对重组基因工程菌(毕赤酵母甲醇利用缓慢型)的摇瓶发酵条件进行了优化，进一步探索了基因工程菌表达猪IFNα的发酵工艺，包括种细胞密度对初始发酵期的影响，补加甘油、甲醇速率条件的控制等。结果表明，摇瓶发酵时，诱导时间应为96h，甲醇浓度应为8g／L，发酵pH范围为6.4-9.0，较适接种量2∶1。在分批发酵，接种量为10％且种子细胞光密度(OD600)为5-6时，较有利于细胞的高密度培养，在补料发酵时，根据溶氧控制甘油流加速率与时机，细胞干重达到118.75g／L，在48h重组猪IFNα表达量达到1.304g／L。 第二部分 两种鸡细胞因子的克隆 由于重组动物细胞因子的使用，可以更有效地防止动物疫病的流行，减少畜牧业因疾病造成的损失，因此，其具有巨大的社会效益。目前，对各种动物细胞因子产生来源、分子结构和基因、相应的受体生物学功能以及与临床的关系等进行了大量的研究，成为当今基础免疫学和临床免疫学研究中一个活跃的领域。 本研究应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术，对鸡白介素-1β(CHIL-1β)和鸡粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(CHGM-CSF)基因进行了扩增。试验结果表明，鸡脾淋巴细胞在伴刀豆球蛋白(ConA)30ug／ml、细胞浓度1×10~6／ml、诱导4、8、12、16、20小时后，均能表达IL-1β，将RT-PCR产物分别克隆到p MD19-T载体上，测序并进行序列分析，结果表明克隆到的分别为CHIL-1β的部分编码序列(长715bp)及包含5个内含子、6个外显子的CHIL-1β基因序列。后者与国外报道的序列相比，在第4个内含子上有121bp的差异。同时应用连续延伸PCR技术将IL-1β连接成完整的编码序列。 鸡GM-CSF仅在ConA刺激22时表达，在其他情况下未检测到，其与已报道的序列同源性达到99.8％。