【摘 要】
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玉屏风多糖（Yupingfeng polysaccharides,YPF-P）已被证明具有显著增强免疫调节的活性。在前期实验中,本课题组已掌握了YPF-P的制备工艺,并对玉屏风多糖中各单糖成分的组成进行了分离与鉴定。为了探索YPF-P的药用价值,拓宽临床应用范围,课题组采用逆向蒸发法制得玉屏风多糖脂质体（Yupingfeng polysaccharide Liposomes,YPF-PL）新剂型。
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玉屏风多糖（Yupingfeng polysaccharides,YPF-P）已被证明具有显著增强免疫调节的活性。在前期实验中,本课题组已掌握了YPF-P的制备工艺,并对玉屏风多糖中各单糖成分的组成进行了分离与鉴定。为了探索YPF-P的药用价值,拓宽临床应用范围,课题组采用逆向蒸发法制得玉屏风多糖脂质体（Yupingfeng polysaccharide Liposomes,YPF-PL）新剂型。研究表明该剂型具有较高的包封率与良好的缓释作用。本论文结合体内动物试验和体外细胞试验,运用常规组织切片、免疫组织化学、免疫荧光、流式细胞术和ELISA等多种研究方法,对比研究玉屏风多糖脂质体（YPF-PL）与玉屏风多糖（YPF-P）对雏鸡免疫系统的影响。探讨YPF-PL对雏鸡中枢免疫器官、外周免疫器官以及黏膜相关淋巴组织的影响,从形态结构与免疫功能的变化,研究新型制剂YPF-PL的免疫调节作用。180羽13d雏鸡随机均分为6组,分别为空白对照组（B组）,免疫对照组（I组,仅免疫不给药）,玉屏风多糖对照组（YPF-P组,200mg/Kg）,低、中、高剂量YPF-PL组（YPF-PLL组100mg/Kg、YPF-PLM组200mg/Kg、YPF-PLH组400mg/Kg）,YPF-P组和低、中、高剂量YPF-PL组连续两次给药,每次持续7d;期间进行H5N1禽流感灭活疫苗免疫,42 d每组随机剖杀10只。采集雏鸡中枢免疫器官（法氏囊）、外周免疫器官（脾）、黏膜相关淋巴组织（肺和空肠）,常规石蜡切片、H.E染色、图像分析技术观察其组织结构的变化;采用免疫组织化学、免疫荧光染色技术,分别检测法氏囊IgA+、IgM+、IgG+B淋巴细胞和活性五肽（Bursopentine,BP5）的表达情况。在体外分离制备脾淋巴细胞悬液,MTT法测定脾淋巴细胞的增殖活性和协同Con A的转化能力;流式细胞术检测脾淋巴细胞中Bu-1+B细胞、CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群比例变化。最后,以ELISA方法检测肺和空肠段分泌型SIgA含量;图像分析技术测定空肠GC、IEL、LPL等黏膜免疫效应细胞的数量变化。结果显示,YPF-PL对雏鸡免疫系统组织结构的影响有以下方面:1.YPF-PL可使法氏囊髓质与皮质面积比值升高,明显增大法氏囊淋巴小结（滤泡）和小叶（皱襞）体积;2.显著增宽脾白髓面积,白髓和红髓淋巴细胞数量明显增多;3.肺组织染色加深,淋巴细胞弥漫性增多;肺房壁增厚明显,其间可见多量淋巴细胞;支气管相关淋巴组织体积增大,毛细血管内壁淋巴细胞附着和游出现象增多,肺组织淋巴细胞归巢过程明显;4.显著促进空肠绒毛增长、提高V/C比值,保护小肠结构完整性,巩固空肠黏膜机械免疫屏障。YPF-PL对雏鸡免疫系统功能的影响有以下方面:1.能明显升高法氏囊IgM+、IgA+和IgG+B细胞表达率,显著提高活性肽BP5的表达强度;2.能明显刺激鸡脾淋巴细胞增殖,激发T淋巴细胞增殖转化,同时升高鸡脾Bu-1+B淋巴细胞、CD3+、CD4+T淋巴细胞亚群比例,显著提高CD4+/CD8+T淋巴细胞比值;3.明显增加空肠GC、IEL和LPL细胞数量,显著促进空肠和肺黏膜SIgA的分泌。综上,本研究表明YPF-PL对雏鸡免疫系统结构与功能具有显著的正向调控作用。
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