【摘 要】
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兴国红鲤是市面上常见的食用鱼,养殖遍布全国,具有巨大的经济效益价值。育种过程中,常有雄雌鱼性成熟不同步,繁殖季节雄鱼精液过剩,反季节繁殖缺少精液等一系列问题。而玻璃化超低温保存技术打破了时间空间上的限制,随时随地可以使用。本研究玻璃化超低温保存技术,除了通过检测精子激活率、快速运动时间、寿命等常规手段来对冷冻后的精子质量检测评价外,还对解冻后精子的相关酶活性的检测和超微结构观察分析,从而系统性的完
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兴国红鲤是市面上常见的食用鱼,养殖遍布全国,具有巨大的经济效益价值。育种过程中,常有雄雌鱼性成熟不同步,繁殖季节雄鱼精液过剩,反季节繁殖缺少精液等一系列问题。而玻璃化超低温保存技术打破了时间空间上的限制,随时随地可以使用。本研究玻璃化超低温保存技术,除了通过检测精子激活率、快速运动时间、寿命等常规手段来对冷冻后的精子质量检测评价外,还对解冻后精子的相关酶活性的检测和超微结构观察分析,从而系统性的完善了精子超低温保存的方案,为实际生产提供一定的理论指导。1.kurokura、D-17、ASP、任氏液四种稀释液搭配四个浓度DMSO做为抗冻剂,液氮冻存10d后解冻,测得kurokura稀释液搭配10%浓度DMSO的精子活力最好;分别设置了四个梯度浓度DMSO、DEF、甲醇、乙二醇四种试剂配kurokura为稀释液来保存,液氮冻存10d,10%浓度的DMSO保存的精子活力高于其他组别;设置5个梯度的稀释倍数,10d后解冻检测,发现10倍的稀释倍数效果最好;设置5个梯度的平衡时间,10d后复苏,整体活力呈现先升后降的趋势,平衡时间10min的效果最佳;设置四个梯度解冻温度,37℃水浴13s取得了效果最好;解冻后0.65%Nacl的激活液对精子激活效果最好。2.鲜精和经1d、10d、30d三个不同时间冻存的精子分别检测总ATP酶、SDH（琥珀酸脱氢酶）、LDH（乳酸脱氢酶）、CAT（过氧化氢酶）、SOD（超氧化物歧化酶）、GR（谷胱甘肽还原酶）。鲜精的总ATP酶和三组冻精之间有显著性差异（P<0.05）,整体来看冻精的总ATP随着时间的延长整体呈现下降的趋势;鲜精SDH酶活性和其他三组冻精有显著性差异（P<0.05）,冻精的SDH酶活性整体呈现先降后升的效果;鲜精LDH酶活性和其他三组冻精有显著性差异（P<0.05）,随着保存时间的加长整体酶活性呈现下降的趋势,保存1d和10d的没有显著差异性（P>0.05）;鲜精的SOD酶活性和鲜精相比,冷冻后的精子SOD酶的活性明显的下降,冻精和鲜精之间有显著性差异（P<0.05）;鲜精CAT酶活性高于冻精,冻精的CAT酶活性随着时间的延长而降低;GR酶活性经超低温冻存和时间的加长,酶活性显著升高。3.兴国红鲤精子在电子显微镜下看到是由头、中、尾三部分组成。正常的精子头部呈卵状。中部短且不明显,在细胞核的后面连接着,主要是由中心粒复合体和袖套组成。精子的鞭毛是从袖套腔里延伸出来,形态细长,切断可以看到典型“9+2”微管结构,鞭毛的两侧有侧鳍。经30d玻璃化超低温保存后的精子损伤主要表现在,细胞质膜褶皱破裂,细胞质泄漏,电子致密物质明显疏松,线粒体吸水膨胀脱落,鞭毛严重断裂,鞭毛两边侧鳍不规则破损等。研究结果表明,采用kurokura稀释液搭配10%DMSO抗冻剂最终浓度10倍稀释精液,平衡10min后液氮保存,37℃水浴13s复苏最适宜兴国红鲤精液玻璃化超低温冻存;而玻璃化超低温对精子里面的酶活性影响也是十分明显,导致冻精的酶活性普遍偏低;从精子超微结构来看,少部分精子的结构不同程度上受到了超低温的损伤,从而影响了精子活率。
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