藏药桃儿七[Sinopodophyllum hexandrum（Royle）Ying]是小檗科鬼臼亚科桃儿七属多年生的草本植物。随着鬼臼毒素作为抗癌药物前提物的应用,药用市场对其的需求量与日俱增,再加之桃儿七自身资源短缺不足,如何合理开发和利用桃儿七就变成了当前研究的热点。本文在课题组前期的研究基础上,以桃儿七种子为研究对象,开展后续研究:首先通过组织培养法从桃儿七种子中分离内生真菌,经纯化后借助显微形态学、分子生物学等方法鉴定得到的内生真菌菌属;然后以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌、小麦赤霉菌、黄瓜枯萎病菌为指示菌筛选出高抑菌活性的内生真菌菌株,接着进一步对其发酵工艺进行优化,最后初步鉴定了高抑菌活性内生真菌的次级代谢产物。主要研究结果如下:1.内生真菌的分离和纯化以组织分离法,从桃儿七种子中纯化得到的内生真菌共9株。通过鉴定,确定了种子1属于Mucor（毛霉属）;种子2属于Talaromyces（篮状菌属）;种子3,种子9属于Penicillium（青霉属）;种子4属于Rhizoctonia（丝核菌属）;种子5属于Aspergillus（曲霉属）,种子6,种子7,种子8属于Fusarium（镰孢菌属）。2.高抑菌活性菌株的筛选分别采用菌饼法、牛津杯法测试9种内生真菌菌株及次级代谢产物的抑菌活性,结果显示9种内生真菌对5种指示菌均有不同程度的抑菌活性,但以镰孢菌属内生真菌的抑菌活性最强,同时在稳定性实验中,该菌种的次级代谢产物也较为稳定。3.高抑菌活性菌株发酵工艺的优化首先通过单因素考察及Plackett-Burman试验设计法筛选出影响高抑菌活性种子7内生真菌发酵的主要因素,然后再借助响应面法优化工艺参数,得到的最优工艺参数为:接种量6.5%,发酵时间38 h,转速185 r·min^-1,在最优工艺参数下抑菌直径预估为7.34 mm。验证此条件下的抑菌直径结果显示为7.34 mm（RSD=16.56%）,预测值与真实值的偏差为1.05%,结果显示该发酵工艺良好,此优化过程准确可靠。4.次级代谢产物结构鉴定研究采用UPLC/Q-TOF-MS法测定高抑菌活性内生真菌正丁醇发酵液,从中共分离得到43个化合物,初步鉴定了其中的37个化合物。主要包括鬼臼毒素等衍生物木脂素类、甾体类、苷类及酚酸类等。实验证明桃儿七种子中分离的高抑菌活性内生真菌能够产生与宿主植物相同的生物活性物质——鬼臼毒素,为今后关于桃儿七内生真菌的资源开发提供了新的思路。