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目的:翼状胬肉是眼科较为常见的眼表疾病之一,表面为呈三角形增厚的球结膜组织病变,其头部侵袭生长入角膜,体部位于睑裂区的一侧,大多生长在鼻侧,增生的翼状胬肉组织肥厚、血管扩张向角膜中央生长,可引起角膜散光而导致视力下降。如进入瞳孔区则严重影响视力,尤其是复发型翼状胬肉给病人造成美容缺陷和视力损害[1]。现研究表明翼状胬肉是一组织增生性结膜疾病其发病机理仍不十分清楚,可能与细胞异常增殖和凋亡异常有关。细胞稳态的维持依赖于细胞增生和凋亡两种过程。正常情况下,这两种过程处于协调的对立统一状态以确保细胞生死有序。目前已发现的凋亡相关基因多达数十种,根据其功能的不同分为三类:抑制凋亡基因,如EIB,Bcl-2等;促进凋亡基因,如Fas,Bax,p53等;双向调控基因,如c-myc,Bclx等。P53和P21基因参与细胞DNA的修复与合成,调节细胞的分化和凋亡,控制细胞的周期,是引起人类肿瘤发生最常见的突变基因。P53基因突变在翼状胬肉发病中的作用,已得到多数学者的认可[2]。P53基因产物可阻止细胞进入S期,参与抑制细胞增生,并促使DNA损伤的细胞进入程序化死亡。突变型P53基因可翻译成异常P53蛋白,并在细胞内聚集。胬肉上皮细胞异常表达P53蛋白,提示胬肉上皮细胞呈增生活跃状态。本研究P53与P21在翼状胬肉中的表达,旨在探讨P53与P21在翼状胬肉发病机制中的作用,为翼状胬肉的治疗、预后等基础和临床研究提供理论依据。
方法:选择本院2009.1-2009.11门诊初发的进行期翼状胬肉手术患者中选标本30例作为病例组(术后经病理检查确诊是翼状胬肉的标本)其中男性15例,女性15例,年龄33~68岁,平均年龄48.36±5.28岁,病程平均11个月;同期正常结膜(斜视手术患者结膜)30例作为对照组,其中男性14例,女性16例,年龄34~68岁。平均年龄为46.95士1.53岁。所有病例均排除其他角膜、结膜疾患,排除青光眼、虹膜炎及其他眼底疾患,排除全身疾患。应用HE法及免疫组化法检测30例翼状胬肉组织和30例正常结膜中P53与P21的表达。取实验组和对照组进行固定和包埋、切片、脱蜡,常规HE染色后,滴加第一抗体,4℃过夜:滴加生物素化第二抗体(IgG),37℃20分钟;切片上滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液(S-A/HRP)、DAB显色、苏木素复染;显微镜观察:选择实验组和对照组的阳性和阴性组织相、进行100×和400×的显微照相。表达的强弱均以IHS为准,免疫组化评分(immunohi-stochemical scores IHS)方法见参照[4]文献,结合阳性细胞百分比及阳性细胞染色强弱两个方面评分。统计学方法采用非参数秩和检验;所有数据在SPSS13.0统计软件上进行,以α=0.05做为检验标准。
结果:P53与P21在翼状胬肉及正常结膜中均有阳性表达,且P53在翼状胬肉中高表达,P21在翼状胬肉中低表达。
1 两组P53IHS数值比较:病例组IHS的Z值为-6.626,p值为0.001(p<0.05),二者差异有统计学意义;(Tablel)
2 两组P21IHS数值比较:病例组IHS的Z值为-6.818,p值为0.001(p<0.05),二者差异有统计学意义;(Table2)
3 病例组P53与P21的比较:两组IHS数值比较Z值为-4.733,p值为0.001(p<0.05),两组的差异有统计学意义,两者的IHS值用Spearman秩相关分析结果r值为0.00l(r<0.05)有统计学意义。
结论:P53与P21在翼状胬肉及正常结膜中均有阳性表达,且P53在翼状胬肉中高表达,P21在翼状胬肉中低表达。P53在翼状胬肉中的表达较正常结膜中的表达明显升高,提示翼状胬肉中细胞凋亡基因受到损伤,抑癌活性丧失,使它具有很强的组织增殖能力。P21在翼状胬肉中的表达较正常结膜中的表达明显降低,提示由于P21的降低,机体不能产生正常的蛋白,使细胞内信号传导紊乱,细胞增殖失控,从而使组织具有很强的增殖能力。二者与翼状胬肉的表达有一定相关性。翼状胬肉是多因素参与的复杂的病理过程,选择性P53抑制剂与P21增强剂可以成为治疗翼状胬肉新的靶点,对抑制进展期翼状胬肉的提供新的思路。P53与P21在翼状胬肉形成过程中的相互作用机制尚不完全清楚,对此还需进一步研究。