小鼠抗猪囊尾蚴单链噬菌体抗体库的构建

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目的 构建小鼠抗猪囊尾蚴的全套单链抗体噬菌体表面展示文库,从中筛选与猪囊尾蚴粗抗原高亲合力的单链抗体,为猪囊虫病的诊断、预防奠定基础。方法 从猪囊尾蚴粗抗原免疫的小鼠脾淋巴细胞中提取总RNA,反转录成cDNA后,用抗体可变区混合引物扩增全套轻、重链可变区基因,经重叠延伸反应,装配成单链抗体(ScFv)基因,将其克隆到噬菌体载体pHEN1中,构建单链抗体噬菌体抗体库。对抗体库进行亲和筛选后,ELASA法鉴定抗猪囊尾蚴单链抗体活性。结果 经过3轮“吸附——洗脱——扩增”的富集过程,phage—ELASA得到一个活性较高的与猪囊尾蚴抗原结合的克隆。序列测定符合抗体可变区结构特点。结论 成功构建了全套抗猪囊尾蚴单链抗体噬菌体展示文库,并筛选得到具有猪囊尾蚴粗抗原结合能力的单链抗体基因。
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