人脑胶质瘤是发病率和恶性程度均非常的一类人脑肿瘤.多型性胶质母细胞瘤是其中恶生度最高的一种.在胶质瘤由低恶性度到高恶性度的演化过程中,一些癌基因的激活和一抑癌基因的失活被认为很可能发挥了关键性的作用.但是,到目前为止人们仍然对人脑胶质瘤的发生和发展的分子机制缺乏清晰的了解.为了研究人脑多型性胶质母细胞瘤的发生和发展的分子机制,确定与这一过程相关的基因,该文通过所建立的全反式维甲酸诱导分化体系和差异显示PCR技术,系统地分析了人脑胶质母细胞瘤BT-325细胞系在维甲酸诱导分化前后基因的差异表达情况,确定参与这一分化过程相关的基因,特别是一些目前还未知的基因.在种类广泛的分化诱导试剂中,维甲酸是应用极为广泛的一类.维甲酸作为维生素A的一类重要的衍生物,人们很早即被发现它对很多肿瘤细胞具有诱导分化作用.在临床治疗上,作为一种阻止肿瘤细胞恶性生长和促进细胞分化的化学药物,维甲酸也得到了广泛的应用.使用维甲酸诱导肿瘤细胞分化已经成为肿瘤学研究领域中所经常使用的一项非常成熟的技术.在该文中,形态学方面的数据清楚的确定了该分化体系成功地诱导BT-325细胞发生了分化.该文成功地利用mRNA差异显示PCR技术(DDRT-PCR),得到了一批新cDNA序列有关表达数据.文本成功的应用了DDRT-PCR方法,并对文献中介绍的传统的方法进行的一些改进,如单碱基锚定引物和对PCR扩增体系的改进,提高了DDRT-PCR方法的效率,为此方法应用于基因的筛选打下了良好的基础.该文应用混合cDNA探针对数十个来自独立克隆的cDNA(EST)作杂交分析,只需消耗少量的mRNA及放射性同位素,成本低、效率高、速率快、特异性强.选择若干可能参与这一分化过程的EST作为探针筛选全长cDNA.目前已从人睾丸cDNA文库筛选出1个的全长cDNA.该cDNA序列相关软件分析,含有完整的终止密码子和起始密码子,有3′末端含有PolyA尾,在其上游含有一个典型的加尾信号.该基因被命名为GDRI.GDRI基因长度为1535pb,可编码一种343个氨基酸的蛋白质.含丰富的亲水氨基酸,在C-末端含有一个较大的疏水区.二级结构预测,可能含有较长的α-螺旋.在数据库中进行的核苷酸和氨基酸序列的同源性比较显示该基因没有发现同源基因,还无法将其确认为某个基因家庭的成员.PROSITE数据库分析显示在其氨基酸序列中可能存在的几种基序,这几种基序能否作为功能性的位点存在还有待实验的进一步证实.在成人多组织RNA中进行的Northern-blot杂交显示,GDRI基因在骨骼肌、心脏中表达水平较高,在脑有一定程度的表达,而在其它如肺、肝、肾等组织中的表达水平较低.该文没有得到GDRI基因在RT-325细胞中的Northern-blot杂交结果,可能的原因是GDRI基因在该细胞中的表达水平较低,难以通过Northern-blot杂交检测出来.另外一个用于全长筛选的EST克隆HGBBT028也用BT-325细胞的RNA进行了Northern-blot杂交,以确定该EST在细胞分化前后的表达差异.结果显示,与之相应的基因在BT-325细胞中存在两种转录本,分别为2.8和2.3kb.在参照β-actin对照进行了校正之后,结果是2.8转录本在分化后的表达水平有所下降(1.5:1).该EST全长cDNA的筛选正在进行中.该文在全长cDNA的克隆过程中,.充分的利用了现有生物学数据库资源,将PCR扩增和杂交筛选结合了起来,极大的提高了文库筛选的效率和特异性.并对数据库中GDRI基因的相关信息作了较广泛的搜寻,为进行下一步关于GDRI,基因的功能研究获得了一些关键的数据.