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目的:本课题拟以顺铂(cisplatin,DDP)化疗肝损伤为切入点,建立顺铂化疗小鼠肝损伤模型,观察针灸治疗对小鼠肝脏的病理形态、血清中谷丙转氨酶(ALT)与谷草转氨酶(AST)浓度、肝脏组织内活性氧(ROS)和超氧化物歧化酶(SOD)的含量的影响,初步揭示针灸修复顺铂化疗肝损伤的作用和机理。 方法:将50只健康SPF级雄性KM小鼠喂养5天后称重,待体重达到实验标准(28±2g)后,挑出40只选用随机分层分组法平均分配为空白(A)、模型(B)、针刺(C)、艾灸(D)四组,并染色编号。然后建立顺铂化疗肝损伤模型,采用腹腔注射的给药方法,按照0.01ml/g的剂量,A组小鼠给以0.9%生理盐水,其他组给以顺铂溶液,给药1次,1天后造模成功。从造模成功至治疗结束,固定人员定时逐日观察记录各组小鼠毛色、饮食、体重等一般情况变化。A、B组小鼠逐日定时、定员固定在特制鼠板上,不施加其他条件,每只每次固定6min,连续固定5天;C、D组小鼠逐日定时、定员固定在特制鼠板上后,C组施以针刺治疗,D组施以艾灸治疗,每只小鼠每次治疗6min,持续治疗5天。治疗完成当日禁水、禁食。次日取材,采用小鼠摘除眼球取血法留取1ml新鲜血液,离心取上清液,待用生化分析仪检测每只小鼠血清内谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的浓度,接着取出完整肝叶,分离肝左右叶,其中左叶保存于配好的甲醛溶液中以制备病理切片用,右叶保存于-80℃冰箱中,以备用酶联免疫反应法(ELISA)测定ROS和SOD活性。最后,建立数据库,用统计软件对其数据进行分析,得出结论。 结果: 1、各组小鼠肝脏组织学形态观察结果:在400倍镜下,观察肝组织病理切片,空白组小鼠肝组织结构清晰,细胞结构较完整,排列较齐,未发现有明显异常;模型组小鼠肝细胞排列较为疏松,少部分细胞轻度肿胀,汇管区附近呈现点灶状坏死结构;而针刺组、艾灸组小鼠肝组织情况整体较好,肝细胞结构完整,排列较齐,在汇管区周围出现个别坏死细胞,与模型组比较,其肝组织细胞损伤程度较轻。 2、各组小鼠血清中ALT、AST浓度的变化:治疗结束后,模型组小鼠血清内ALT、AST含量较高,与空白组比,差异具有统计学意义(P﹤0.05),提示顺铂化疗造成小鼠肝功能异常;针刺组和艾灸组小鼠血清内ALT、AST含量较低,与模型组比,差异具有统计学意义(P﹤0.05),提示针刺和艾灸具有显著保护肝脏功能的作用;针刺组与艾灸组比,差异不具有统计学意义(P﹥0.05),提示针刺和艾灸对肝脏功能的保护作用无显著差异。 3、各组小鼠肝脏组织中ROS、SOD浓度的变化:治疗结束后,模型组小鼠肝脏内ROS含量较高,SOD含量较低,与空白组比,差异具有统计学意义(P﹤0.05),提示顺铂化疗造成小鼠肝脏氧化损伤,而针刺组和艾灸组小鼠肝脏内ROS含量较模型组低,SOD含量较模型组高,与模型组比,差异具有统计学意义(P﹤0.05),提示针刺和艾灸具有减轻肝脏氧化损伤的作用;与针刺组比,艾灸组小鼠肝脏内ROS含量较低,SOD含量较高,差异具有统计学意义(P﹤0.05),提示在减轻肝脏氧化损伤方面,艾灸比针刺更具有优势。 结论: 1、腹腔注射顺铂溶液能够对小鼠肝脏造成严重损伤,导致肝细胞出现变性坏死,而针灸能够通过一定的作用途径保护肝细胞,减轻顺铂对肝脏损伤的程度。 2、腹腔注射顺铂溶液能够造成小鼠肝脏功能异常,导致小鼠血清内ALT与AST浓度明显升高,而针灸能够减轻肝脏的损伤,降低血清内ALT与AST的浓度,促进肝功能恢复。 3、顺铂化疗能够引起小鼠肝组织中活性氧(ROS)活性的提升,并降低超氧化物歧化酶(SOD)的活性,这可能是顺铂造成肝脏损伤的主要病理机制之一,而针刺和艾灸治疗能够降低ROS活性,同时提升SOD的活性,促进机体氧化反应的恢复,提示针灸能够通过调控ROS与SOD的表达起到修复肝脏损伤,保护肝功能的作用,这可能是针灸保护顺铂化疗肝损伤的主要作用机制之一。