巴西橡胶树HbMyb1基因和OPV-10<,390>连锁标记原位PCR定位的研究

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本研究采用原位PCR技术对橡胶树死皮病抗性相关HbMyb1基因和抗白粉病基因连锁标记OPV-10390进行了物理定位,结果如下:成功地建立了橡胶树染色体原位PCR技术体系。该原位扩增的PCR反应液总体积为50μl,各反应组分的终浓度为:1×buffer,4.5 mM MgCl2,0.5 mg/ml BSA,200μM的dATP、dCTP、dGTP,72μM的dTTP,4μM DIG-11-dUTP,5U/5μl的Taq DNA聚合酶,2.4μM的Primer;原位PCR扩增程序为:95℃预变性后进行20个循环反应,94℃变性30S,53℃(视引物Tm值)退火1min,72℃延伸70S,最后72℃继续延伸7min;扩增后的洗脱为0.1×PBS 4~5 min,0.1×SSC/(吐温20)2×5min。利用本研究所建立的原位PCR技术,首次对橡胶死皮病抗性相关HbMyb1基因和抗白粉病基因连锁标记OPV-10390进行了染色体定位。在热研7-33-97和RRIM600叶片细胞不同分裂时期均扩增到1~2个信号。橡胶HbMyb1基因初步定位于7-33-97的第5号染色体长臂上,信号位点到着丝粒的百分距离为15.21。橡胶抗OPV-10390初步定位于RRIM600的第8号染色体长臂及11号染色体短臂上,信号位点到着丝粒的百分距离分别是16.99、49.58。对热研7-33-97(RRIM600×PR107)和橡胶栽培品系RRIM600进行了核型分析。热研7-33-97的核型公式为2n=36=34m(4sat)+2sm,第15号染色体为亚中部着丝点染色体(sm),其余17对染色体为中部着丝点染色体(m),第6、7号染色体短臂具有随体,染色体绝对长度变化范围为3.14~6.36μm,相对长度为3.67%~7.44%,平均臂比为1.44,核型属2B型。RRIM600核型公式为2n=36=28m(4sat)+8sm,第11号、12号、14号及17号染色体为亚中部着丝点染色体(sm),其余14对染色体为中部着丝点染色体(m),第6、7号染色体短臂具有随体,染色体绝对长度变化范围为3.92~8.47μm,相对长度为3.45%~7.47%,平均臂比为1.60,核型属2B型。
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