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[目的]筛选调节始基卵泡募集的]microRNAs(miRNAs)、探讨miRNAs对始基卵泡募集的调控机制。[方法]通过miRNA芯片技术检测miRNAs在3天及5天小鼠卵巢中的表达,实时定量PCR技术验证差异表达的miRNAs,利用NovelBio数据库采用elim算法对差异表达的miRNAs进行基因功能的显著性分析。利用Fisher精确检验,得到P值,通过多重比较检验,确定pathway的FDR,最后得出显著性信号通路。随后基于GO及KEGG分析构建miRNA-mRNA信号调节网络.采用原位杂交技术对有显著意义的miR-145的表达进行定量及定位。MiR-145antagomir处理体外培养3天乳鼠卵巢,共聚焦显微镜观察antagomir进入卵巢的情况,通过实时定量PCR技术验证其干扰效应。HE染色、免疫组织化学、卵泡计数、PCR技术评估其对乳鼠卵泡发育的影响。采用PCR技术、免疫组织化学、Western Blot及荧光素酶活性检测验证miR-145的靶基因。Western Blot检测下调miR-145表达后对Smad、非Smad信号通路及凋亡相关蛋白表达的影响。[结果】在5天乳鼠卵巢中显著上调的miRNAs包括miR-122,miR-145,miR-380-3p,miR-680,miR-484,miR-496,miR-17,miR-1906,miR-136*,miR-125-3p等共15个。下调miRNAs包括miR-302*,miR-466g,miR-466-3p,miR-500,miR-382*,miR-574-3p,miR-1196等共9个。随机挑选8个miRNAs进行验证,实时定量PCR结果显示差异表达的miRNAs表达趋势同芯片结果一致,差异有显著意义(P<0.05),并证实miR-145为升高倍数排列第二的小分子RNA。生物信息学分析结果显示,上调miRNA的靶基因参与的显著功能包括细胞粘附、凋亡、小GTP酶介导的信号传导、细胞周期、蛋白修饰过程、DNA修复、血管形成、离子转运等。下调miRNAs的靶基因参与的显著功能则包括细胞粘附、细胞周期、凋亡、蛋白转运、细胞内信号级联传递、RNA剪切等等。上调]miRNA的靶基因参与的显著信号通路49条,下调1miRNAs的靶基因参与显著信号通路29条(P<0.001)。在差异表达miRNAs参与的显著信号通路中TGF-p信号通路在卵泡募集及发育过程中发挥重要作用,因此我们以参与TGF-p信号通路的所有有显著意义的miRNAs及其参与显著功能的靶基因为基础,构建miRNA-mRNA调节网络。由于在上调miRNAs中miR-145表达量排列第二,同时该miRNA调节的靶基因Tgfbr2、Acvr1b、Smad3、Smad5在TGF-p信号通路中均占据重要地位,故以miR-145为研究对象探讨其调控机制。原位杂交结果显示miR-145在3天中表达不明显,在5天乳鼠卵巢初级卵泡中的颗粒细胞中表达明显高于3天。MiR-145通过作用于靶基因Tgfbr2发挥效应,给予miR-145antagomir处理体外培养3天乳鼠卵巢,可使始基卵泡数量及初级卵泡绝对数量显著减少(P<0.05),但初级卵泡所占比例相对增加(P<0.05)。进一步研究发现MiR-145通过作用于靶基因Tgfbr2发挥效应。MiR-145antagomir通过上调TGFBR2,激活Smad信号通路中的SMAD3而不是非Smad信号通路中的P38MAPK或JNK促进始基卵泡细胞的凋亡。[结论]在始基卵泡募集及始基卵泡维持的过程中,存在多个miRNAs的调控,miRNAs可通过调节多条信号通路发挥调节始基卵泡募集的过程。其中,miR-145在此过程中发挥重要作用,该小分子RNA通过调节TGFBR2的表达水平调节TGF-β信号通路进而调控始基卵泡募集及维持始基卵泡池的功能。