编码内质网膜蛋白的基因hRTN3及其小鼠同源基因mRTN3的克隆与功能研究

来源 :中国协和医科大学 中国医学科学院 北京协和医学院 清华大学医学部 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jonnyyu
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我们在批量分离和克隆与脑发育及功能维持相关的cDNA时,从人的胎脑文库中克隆到一个全长cDNA-hRTN3及小鼠的同源基因mRTN3,它们均属于RTN(reticulon)家族.hRTN3 cDNA全长2559bp,含有一个编码236个氨基酸残基的开放阅读框架.序列的第137-139位核苷酸为起始密码子,旁侧序列符合Kozak规律,在开放性阅读框架5上游有一个框内终止密码子,3有典型的加尾信号,这些特点均显示该序列为一全长的cDNA.此cDNA序列已送至GenBank登录,接受号为AF119297.实验结果显示mRTN3在大脑皮层、海马、丘脑、脑干的神经核团及脊髓的非胶质细胞中有强信号.为进一步了解hRTN3蛋白的亚细胞定位,我们构建真核表达载体,使hRTN3cDNA编码区重组到绿色荧光蛋白基因的上游,并用脂质体(Lipofectamine)转染到CHO细胞,48小时后得到高效表达.通过共聚焦显微镜观察到融合蛋白定位于细胞质中,呈不均匀分布,结合hRTN3 C末端所具有的内质网膜的锚定序列KKXX,由此推断该蛋白位于内质网膜.实验结果显示,hRTN3在正常脑组织中主要为神经元大量表达,在胶质细胞中基本无信号;在神经胶质细胞瘤中,hRTN3在肿瘤细胞中表达量明显提高;但是在不同恶性程度的胶质细胞瘤中,其表达量未见明显差异.因此,我们推测hRTN3基因表达量的改变很可能是胶质细胞瘤发生过程中的一个早期事件.此外为鉴定hRTN3在中枢神经系统中的相互作用蛋白,推断hRTN3在中枢神经系统中的功能,我们还利用酵母双杂交系统以hRTN3全长及不同区段为诱饵蛋白筛选胎脑表达文库,同时验证了hRTN3与Bcl-2Bcl-x1之间的相互作用.
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