矮牵牛(Petunia hybrida.),茄科碧冬茄属,花色丰富、花期长,在园林中的应用极为广泛。同时,矮牵牛转基因较为容易,生长周期短,目前已成为分枝发育及抗逆研究的模式植物。矮牵牛栽培过程中需要多次打顶来控制株型,大大提高了生产成本。因此,培育多分枝的新品种是解决矮牵牛高效生产的关键。此外,干旱等逆境胁迫是限制矮牵牛应用范围的主要因素。因此,培育抗逆性强的新品种是矮牵牛研究的重要方向。为初步探究矮牵牛PhRAX2和PhRAX3的功能,克隆了 PhRAX2、PhRAX3的全长序列以及PhRAX3的启动子序列,对其生物信息学进行了分析,并对PhRAX2及PhR4X3在不同组织,不同处理下的表达特性进行了研究。构建了PhRAX2、PhRAX3过表达载体,以及pPhRAX3融合GUS载体,并转入农杆菌。具体结果如下:1、克隆了R2R3-MYB家族基因PhR4X2,该基因全长864 bp,与烟草NtRAX2的相似性高达70%;克隆1R-MYB家族基因PhRAX3,该基因全长1539 bp,与番茄S1RAX3、辣椒CaRAX3等物种的前80个氨基酸序列相似度极高;克隆PhRAX3的启动子序列,全长1917 bp。该序列含有多个与干旱、生长素响应等调控元件。2、PhRAX2、PhRAX3基因的组织特异性表达分析:(1)PhRAX2在茎尖的表达量最高,约为根的2倍,叶腋和叶的表达量约为根的1.3倍,茎的表达量约为根的1/2。(2)PhRAX3在根的表达量最高,叶片、茎、茎尖和叶腋中的表达量分别为根的2/5,1/5,1/5 和 1/10。3、外源细胞分裂素对PhRAX2的调控分析:6-BA处理6h后PhRAX2基因的表达量上升至对照的1.2倍,12 h后上升至对照的3.5倍,说明PhRAX2能够被细胞分裂素正调控。4、模拟干旱对PhRAX3的调控分析:PEG处理6h后,PhR4X3的表达量上升至对照的12倍,12 h后上升至对照的38倍,而24 h后降低为对照组的1.9倍,说明PhR4X3能够迅速响应干旱胁迫处理。5、将PhR4X2与PhR4X3分别连接至PJL-blue载体,经LR反应,连接至PFK209载体,构建35S::PhRAX2、35S::PhRAX3过表达载体。将PhRAX3启动子序列连接至pCambia1391Z载体,构建pPhRAX3:GUS载体。将这三个载体质粒转入农杆菌,并转化拟南芥野生型,为后续试验奠定了基础。