尿酸对类成骨细胞(MG-63)增殖的影响及其机制研究

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目的:探讨在体外诱导类成骨细胞(MG-63)增殖过程中,尿酸对MG-63增殖能力的影响以及尿酸对转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法:取生长状态好的类成骨细胞(MG-63)分为四个组,对照组是成骨培养基(含50mg/L维生素C、10-8mol/L地塞米松、10-2mol/Lβ-甘油磷酸钠的完全培养基),三个试验组分别是含尿酸的浓度为0.2、0.4、0.8 mmol/L的成骨培养基,对细胞进行诱导和培养。待细胞培养诱导至第14天,利用倒置显微镜,观察各尿酸实验组及对照组的细胞形态学变化;在细胞培养诱导至第7天进行类成骨细胞(MG-63)增殖过程中碱性磷酸酶活性测定;分别在细胞培养诱导至第3d、5d、7d、14d应用CCK-8法检测细胞增殖能力;用免疫荧光-PCR(RT-PCR)技术,分别在细胞培养诱导至第7天和第14天时,检测转化生长因子-β1(TGF-β1)m RNA的表达。结果:(1)倒置显微镜下观察实验组及对照组细胞形态学显示,随着尿酸浓度的增加,细胞数目明显增多,呈现出浓度依赖性。(2)成骨培养基和各尿酸干预成骨培养基诱导的细胞其碱性磷酸酶活性检测提示,随着尿酸浓度增高,碱性磷酸酶活性增加,说明细胞增殖能力逐渐加强;各实验组与对照组的比较以及不同浓度的实验组之间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)CCK-8方法测定细胞增殖率结果显示:尿酸试验组与对照组比较以及各尿酸试验组组间比较,各尿酸实验组细胞的OD值明显高于对照组,并且随着尿酸浓度的增加,OD值逐渐增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。(4)免疫荧光-PCR(RT-PCR)技术检测TGF-β1m RNA结果:培养7天和14天结果均提示,随着尿酸浓度增加,TGF-β1m RNA的表达逐渐增加,尿酸试验组与对照组比较以及各尿酸实验组组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)细胞形态学、ALP活性测定及CCK-8法均证实尿酸能促进类成骨细胞(MG-63)的增殖,具有浓度依赖性和时间依赖性的特点;(2)尿酸通过上调TGF-β1m RNA的表达,促进类成骨细胞(MG-63)的增殖,呈现浓度和时间的依赖性。
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