内皮抑制素相互作用蛋白的研究

来源 :中国人民解放军军事医学科学院 解放军军事医学科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gaolch013
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该研究结合生物信息学、酵母双杂交、细胞培养等方法,对与内皮抑制素结合的侯选蛋白的特性进行了初步分析,不仅有助于阐明其本身抑制血管生成作用的分子机制,还可为以抑制血管生成和相关抑制物为基础的疾病防治提供新思路、新方法.研究结果可概述为以下几个方面:1.构建内皮抑制素诱饵蛋白载体pGBKT7ENDO并转化至酵母菌株AH109,对内皮抑制素自身的转录激活活性进行了分析,结果表明内皮抑制素自身不具转录激活活性.Western-blot结果表明内皮抑制素能在AH109中表达.2.利用酵母双杂交系统系统3(CLONTECH)从人肝细胞预转cDNA文库筛选内皮抑制素的相互作用蛋白,得到了4个与内皮抑制素有特异相互作用的克隆.序列分析和同源检索表明:它们分别为人肌球蛋白(myosin)、载脂蛋白H(apolipoproteinH)、hepsin(一种与膜缔合的丝氨酸蛋白酶)和一未知蛋白HT036.3.利用哺乳动物细胞双杂交系统(Mammalian MATCHMAKER Tybrid experiments)验证内皮抑制素与人肌球蛋白、载脂蛋白H、hepsin和未知蛋白HT036间在哺乳动物细胞水平的特异的相互作用.4.细胞免疫共沉淀(Co-IP)结果显示在哺乳动物细胞水平能检测到内皮抑制素与人未知蛋白HT036间特异的相互作用,进一步确定了此相互作用的真实性和可靠性.5.利用图形工作站,以1K77晶体结构的原子坐标为依据,结合氢原子及侧链的影响,对人未知蛋白HT036的三维结构进行了同源模建.6.将HT036克隆于p CDNA3.1表达载体,转染ECV304细胞后,初步的研究表明有促凋亡现象.
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