【摘 要】
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中华散尾鬼笔(Lysurus mokusin)属于大型真菌,在我国分布广泛,且多认为有毒,研究表明中华散尾鬼笔具备抑菌、杀虫功效,但仍处在初步研究阶段。本文在相关研究基础上,对中华散
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中华散尾鬼笔(Lysurus mokusin)属于大型真菌,在我国分布广泛,且多认为有毒,研究表明中华散尾鬼笔具备抑菌、杀虫功效,但仍处在初步研究阶段。本文在相关研究基础上,对中华散尾鬼笔的液体发酵培养、抑菌效果、抑菌机理、以及对生物的安全性作了深入研究。得到了以下结果:(1)中华散尾鬼笔的液体深层发酵条件优化将菌丝干重作为评价指标,对包括培养温度、pH值、接种量、摇瓶装液量在内的四个因素逐一进行优化,最终得到的中华散尾鬼笔液体深层发酵的优化条件为:温度为25℃C、pH中性、每个摇瓶装液量为220 mL、接种量为3片菌饼。通过发酵条件的优化,每个摇瓶的菌丝干重从0.30 g增加至0.66 g。(2)中华散尾鬼笔正丁醇提取物对灰葡萄孢菌具有抑制作用,抑制效果随提取物浓度的升高而升高,当浓度达到16 mg/mL时,抑菌率为88.76%。经分析,其毒力回归方程为:Y=1.246X-0.805,R2=0.912,得出 EC50=4.428 mg/mL,95%置信限为2.238~13.673 mg/mL。(3)中华散尾鬼笔提取物对灰葡萄孢菌的抑制机制研究表明,提取物对与灰葡萄孢菌生命活动相关的5种酶的活性均有影响。提取物处理造成超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、果胶酶(Pectinase)、纤维素酶(CL)的活性降低,其中第2 d的SOD和PPO活性抑制率分别可达到65.48%和53.86%,POD的抑制效果在第4 d达到峰值,抑制率为68.65%。(4)提取物对灰葡萄孢菌的细胞膜和细胞壁结构有破坏作用。可导致菌体细胞膜透性增强,MDA含量累积增多,致各处理在取样时间节点的培养液电导率和菌丝MDA含量显著高于对照,其中提取物处理的第2 d电导率为1230.579 μs/cm,为对照电导率的1.3倍,处理第6 d的MDA达到对照的2.6倍;外源添加山梨糖醇进行抑菌试验,证明灰葡萄孢酶菌的细胞壁遭到破坏;灰葡萄孢菌的菌丝微观结构观察结果可知,提取物使菌丝形态发生变化、菌丝干瘪、菌丝分隔内凹,并有菌丝破裂的现象出现。(5)中华散尾鬼笔提取物作为保护剂对番茄果实灰霉病的药效显著,当提取物浓度达到64 mg/mL时,病斑控制率可达到74.79%,在浓度高达128 mg/mL时,也未出现提取物引起的果实损伤和毒理伤害;提取物对绿豆种子的24 h发芽率、72 h抑芽率有明显影响,即提取物对绿豆存在一定毒害作用;提取物对斑马鱼的急性毒性试验表明,提取物对斑马鱼的毒性属于低毒,LC50为426.54 mg/L。
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