天然存在的羧肽酶B(carboxypeptidase B，CPB)是一种含锌原子的胰外肽酶，含有7个半胱氨酸，其中6个形成三对二硫键，一个半胱氨酸(Cys)游离。二硫键作为蛋白质侧链间唯一的共价键，对蛋白质的结构，稳定性，功能以及折叠过程具有重要作用，而具有活性结构的CPB含有一个游离的Cys，这个Cys的存在可能会对CPB的折叠复性及其催化活性有影响。本论文将该Cys点突变为Ser，成功构建了表达载体并表达。对表达所得包涵体进行了变性及复性条件优化，复性后蛋白进行纯化及性质研究。论文同时初步探索了培养条件对包涵体质量的影响，以及前导序列对重组羧肽酶B折叠过程的影响。 利用巯基滴定的方法确定了DTT的浓度为50mM时，可以获得几乎全还原的突变羧肽酶原B(mutant procarboxypeptidase B，mproCPB)和proCPB，并比较了部分还原和全还原mproCPB的复性过程，发现包涵体本身含有的部分二硫键有利于mproCPB的复性。 用逐步优化的方法确定了mproCPB最佳复性条件，即50mM Gly-NaOH，pH 9.0，0.1mM ZnCl2，GSH/GSSG=1:2，mproCPB浓度为0.4mg/ml，25℃中复性18h。 经过DEAE-FF一步浓缩并进一步纯化，获得比活为214U/mg的mCPB。研究了mCPB的性质，mCPB发挥活力的最适pH值为7～9；mCPB具有很好的热稳定性，在60℃下，保温40min，酶活没有降低，反而有所升高；mCPB的活力被典型的金属螯合剂、还原剂及Cu2+所抑制，而Mn2+，Ba2+，Co2+被证明是酶的激活剂。以Hyppuryl-L-Arg作为底物时的米氏常数为0.55。双向电泳显示mCPB的等电点为5.35；紫外扫描分析显示其最大吸收值为279nm。 以proCPB为模型，采用不同时间诱导，对所得包涵体进行变复性，研究了包涵体蛋白对蛋白酶K的稳定性以及一定浓度盐酸胍的化学变性，分析与复性率之间的相关性。发现不同诱导时机所得proCPB包涵体的复性率不同，复性率越高的包涵体对蛋白酶K的稳定性越高，在3mol/L，盐酸胍中的溶解性越差。 proCPB经胰蛋白酶酶解激活后，DEAE—FF纯化可获得前导肽。经过对羧肽酶(原)B的复性研究，发现在复性液中加入前导肽，即前导肽作为复性的分子外伴侣，无法帮助任何变性程度的CPB复性，前导肽只能以分子内伴侣的形式即以酶原的方式帮助CPB复性。