论文部分内容阅读
背景:胃癌是最常见的消化道肿瘤之一,它的发病率在所有肿瘤中位列第四,而死亡率位列第二。临床诊疗技术的进步使早期胃癌的5年生存率得到了显著的提高,但是进展期胃癌的预后仍不理想。因此,寻找新的有效的早期诊断指标和治疗靶点显得尤为重要。生长停滞特异性转录子5(GAS5)是一种常见的长链非编码RNA,最近一些证据表明GAS5在肺癌、前列腺癌、膀胱癌、胰腺癌等多种肿瘤中表达显著下调,而提高其表达能够抑制肿瘤细胞的增殖并促进细胞凋亡。并且,GAS5也被发现在胃癌组织及细胞系中低表达,它能通过调控P21和E2F1蛋白的表达抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡。然而,对于GAS5是否是通过调节细胞周期来抑制细胞增殖,目前仍不清楚。目的:本研究探讨GAS5对胃癌细胞周期的影响及分析其相关机制。方法:通过荧光定量PCR法测定胃癌组织及其对应的正常胃粘膜组织中GAS5的mRNA表达量,通过CCK-8分析GAS5对胃癌细胞增殖的影响,通过流式细胞仪检测GAS5对胃癌细胞周期的影响。并且,分别转染pLJM-GAS5、GAS5 siRNA及其对照质粒入胃癌细胞系AGS和MGC-803,并通过Western blotting方法测定转染后细胞中P21、CDK4和CDK6蛋白的表达。结果:荧光定量PCR法测定结果显示:胃癌组织中GAS5的表达量明显低于正常胃粘膜组织。GAS5的表达与胃癌组织的大小及胃癌的临床分期呈负相关。人胃粘膜细胞系GES-1,人胃癌细胞系AGS和BGC-823中GAS5的表达量低于人胃粘膜细胞系GES-1。胃癌细胞AGS中过表达GAS5显著抑制了AGS细胞的增殖。胃癌细胞AGS中低表达GAS5促进了MGC-803细胞的增殖。降低MGC-803细胞中GAS5的表达导致G0/G1期的细胞比例降低和S及G2/M期的细胞比例升高。相反,与转染空质粒的AGS细胞相比,过表达GAS5的AGS细胞中G0/G1期细胞的分布显著增加,而S期细胞的比例显著降低。GAS5的过表达显著提升了AGS细胞中P21蛋白的表达水平,并抑制了CDK6蛋白的表达水平。MGC-803细胞中GAS5的表达沉默抑制了P21蛋白的表达和增强了CDK6蛋白的表达。下调CDK6的表达能显著抑制GAS5siRNA诱导的MGC-803细胞增殖。结论:胃癌组织中GAS5的表达量明显低于正常胃粘膜组织。并且,GAS5的低表达与胃癌组织的大小及胃癌的临床分期有关。GAS5的过表达能够通过抑制细胞周期G1至S期的转换从而抑制胃癌细胞的增殖。GAS5通过上调P21蛋白的表达及抑制CDK6的表达从而发挥调节细胞周期的功能。GAS5有望成为胃癌治疗的潜在靶点。