慢性鼻-鼻窦炎(chronic rhinosinusitis,CRS)病理机制复杂，目前尚存争议。研究证实：花生四烯酸(arachidonic acid，AA)等二十烷酸代谢异常及产物的表达失衡在CRS的病理过程中发挥了重要作用。环氧合酶-2(cyclOOXygenase-2,COX-2)是AA代谢过程中的限速酶，既往的研究表明COX-2在上呼吸道黏膜中表达异常，催化AA合成多种前列腺素(prostaglandins,PGs)和血栓素，并参与调节多种炎症因子，发挥致炎作用。然而，COX-2在CRS黏膜中的表达状况尚存争议，参与调节COX-2的分子机制和信号途径未明。本课题拟通过对人CRS病变鼻黏膜组织和IL-1β诱导体外培养的人鼻黏膜上皮细胞(Iluman nasal epithelia，HNE)致炎过程中COX-2与丝裂原素活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)、核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)信号转导通路关键酶的表达规律及其相互关系的研究，探讨人CRS病理过程中COX-2的表达变化及意义；探索CRS过程中参与调节COX-2的上游信号转导途经及各通路在此过程中的相互关系。通过以上研究可加深对CRS病理机制的认识，为开辟CRS治疗新途径提供试验基础和理论依据。 本研究分为4章。 第1章：COX-2在慢性鼻-鼻窦炎黏膜组织中的定位、表达和意义。 目的 检测环氧合酶-2(COX-2)在慢性鼻-鼻窦炎(CRS)筛窦黏膜和中鼻甲黏膜中的定位和表达，探讨COX-2在CRS不同部位黏膜中的表达差异及其在CRS炎症机制中的作用。 方法 36例CRS按海口标准分3组，每组12例，标本分别取自每例之筛窦黏膜和中鼻甲黏膜，以12个正常黏膜作为对照。应用免疫组化和FO-RT-PCR法检测COX-2的表达，并分析COX-2在CRS筛窦黏膜和中鼻甲黏膜中的表达差异。 结果 COX-2在3组CRS中鼻甲黏膜和筛窦黏膜中较对照组均有较高表达(P=0.000)，主要定位于假复层纤毛柱状上皮细胞和炎性细胞的胞质和核膜；CRS 3组间表达无统计学差异(P>0.05)；CRS各组中鼻甲黏膜和筛窦黏膜间无差异(P>0.05)；CRS同一组中COX-2的蛋白质和mRNA表达水平呈直线正相关(P<0.05)。 结论 CRS筛窦黏膜和中鼻甲黏膜中COX-2表达上调，提示其可能在CRS鼻腔、鼻窦黏膜炎症病理过程中发挥作用。 第2章：MAPK及NF-κB信号转导途径在慢性鼻．鼻窦炎黏膜组织中的表达及与COX-2的关系和意义。 目的 检测慢性鼻．鼻窦炎(CRS)黏膜中环氧合酶-2(COX-2)和丝裂原素活化蛋白激酶(MAPK)及核因子-κB(NF-κB)通路关键酶的表达并探讨其相关性，探索它们在CRS黏膜炎症机制中的作用。 方法 24例CRS筛窦黏膜按海口标准分3组，每组8例，以8个正常鼻黏膜为对照。应用免疫组化和FQ-RT-PCR法检测COX-2、p38丝裂原素活化蛋白激酶(p38MAPK)、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、c-Jun氨基端激酶(JNK)、NF-κB p65和p50的表达，并分析其相关性。 结果 COX-2、p38MAPK、ERK和NF-κB在CRS 3组中均有阳性表达，强度高于对照组(P=0.000)，CRS 3组间表达无统计学差异(P>0.05)；JNK在CRS组和对照组中均无阳性表达。统计学分析表明：COX-2、D38MAPK、ERK、NF-κB p65、p50在CRS各组的蛋白质和mRNA表达水平呈显著正相关；在CRS同一组中COX-2与p38MAPK、ERK的蛋白质和mRNA表达水平呈显著正相关(P<0.05)；COX-2表达与NF-κB p65、p50核内表达显著正相关(P<0.05)。 结论 CRS中COX-2表达上调及其与上游p38MAPK、ERK和NF-κB信号通路具有相关性，提示前者在CRS鼻黏膜炎症中可能受后者调节。 第3章：人鼻黏膜上皮细胞两种原代体外培养方案的比较研究。 目的 比较人鼻黏膜上皮细胞(HNE)两种常用的体外培养方法的效果，探索下一阶段适宜的体外培养方案。 方法 比较组织块培养方案和分离细胞培养方案的HNE体外培养成功率和生长曲线，进行HNE的形态学观察和细胞来源鉴定，以初步了解其生物学特性。 结果 分离细胞培养方案的体外培养成功率(87.5﹪)优于组织块培养方案(83.33﹪)，但无显著差异(P=0.683)。分离细胞培养方案的HNE生长曲线较高于组织块培养方案者。两种体外培养方案的HNE经细胞形态学观察和细胞角蛋白染色均证实为上皮细胞来源。 结论 分离细胞培养方案细胞混杂少，增殖迅速，HNE获取稳定、可靠，较适宜原代培养研究。 第4章：IL-1β诱导鼻黏膜上皮细胞COX-2表达及与上游MAPK、NF-κB信号转导途径的关系和意义。 目的 检测IL-1β诱导人鼻黏膜上皮细胞(HNE)COX-2合成和PGE2释放水平及MAPK、NF-κB信号通路在此过程中的参与状况，探讨其在鼻黏膜炎症发病机制中的作用。 方法 应用Western blot．和FQ-RT-PCR法检测IL-1β诱导下和/或各信号通路选择性抑制剂阻断后，HNEE中COX-2、磷酸化p38丝裂原素活化蛋白激酶(p38MAPK)、磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、NF-κB p65、p50的表达，并分析其相关性。以酶联免疫吸附测定(EIA)检测在此过程中PGE2的释放。 结果 IL-1β呈时间和浓度依赖性诱导COX-2表达及PGE2释放；IL-1β呈浓度依赖性诱导磷酸化p38MAPK、磷酸化ERK、NF-κBp65和p50的表达；COX-2及上述信号通路选择性抑制剂呈浓度依赖性减弱COX-2表达及PGE2释放；NS398对上述信号通路无影响；SB203580可减弱NF-κB表达，但对ERlK信号通路无抑制；PD98059可减少NF-κB表达，但对p38MAPK信号通路无抑制；PDTC或48 1406对ERK和p38MAPK信号通路无抑制。 结论 在HNE中，IL-1β分别通过激活ERK和p38MAPK信号通路进而激活NF-κB通路，参与调节COX-2表达及PGE2释放。