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运用高密度寡核苷酸芯片建立大鼠胰腺发育不同阶段(胚胎(E)12.5,E15.5,E18.5,新生和成年)的基因表达谱,经过生物信息学数据分析发现许多与胰腺功能相关的基因在E18.5相对高表达,这一时期正是胰岛细胞迁移聚集形成典型胰岛结构的关键阶段,而典型的胰岛结构是胰腺发挥正常生物学功能的基础。本研究从基因表达谱中筛选出一条在E15.5和E18.5相对高表达的基因--- paxillin(桩蛋白, Pxn),旨在初步探讨该基因在胰岛细胞迁移、黏附及胰岛结构维持中的作用。
运用RT-PCR技术进一步检测Pxn在大鼠胰腺发育不同阶段的mRNA表达水平;应用免疫印迹检测不同时期桩蛋白表达;运用免疫组织化学检测不同时期桩蛋白在胰腺的定位。RT-PCR与基因芯片中检测的mRNA表达趋势一致,表达量胚胎期高于新生和成年期;免疫印迹结果显示Pxn蛋白在大鼠胰腺发育不同阶段的表达趋势与mRNA表达趋势相反,表达量出生后远高于胚胎期;免疫组织化学结果显示在不同发育时期桩蛋白不仅在外分泌胰腺有表达,而且在胰岛也有表达。
基于以上实验结果,我们推测具有调节细胞聚集、黏附功能的桩蛋白可能参与出生后胰岛重塑。Pxn在大鼠胰腺发育过程中蛋白和mRNA表达趋势相反,其存在的机制可能在于基因转录后水平的调控。