免疫治疗作为继肿瘤手术治疗、放化疗后的一种新的治疗方法,主要是通过活化淋巴细胞激活自身免疫系统,促使淋巴细胞能够识别并杀伤肿瘤细胞。近些年的肿瘤治疗中,通过激活T细胞免疫治疗受到强烈的关注,免疫检查点蛋白PD-1特异性单克隆抗体通过阻断肿瘤免疫逃逸,改善免疫应答显示出较好的肿瘤治疗效果,这表明免疫检查点抑制剂的癌症免疫疗法是有效的治疗方法之一。随着PD-1单抗出现耐药性,越来越多研究转向联合用药,TIM-3同样作为T细胞表面抑制分子之一,通过与其配体Galectin-9结合抑制Thl细胞的功能并使其最终凋亡,同时也调控Th1和Thl7细胞的细胞因子如干扰素（IFN）、白介素（IL2）等分泌,抑制TIM3蛋白活性可增强阻断PD-1的抗肿瘤作用效果,因此制备TIM3单克隆抗体为进一步进行针对性的抗体药物开发有重要意义。本研究首先利用昆虫蛋白表达系统制备了高纯度人TIM3（aa 22-202）胞外结构域蛋白,经过对兔子的三次免疫后,分离兔PBMC细胞,利用多种抗体标记,通过流式分选获得识别人源TIM-3蛋白的记忆B细胞。其次,B细胞与表达CD40L的EL4-B5饲养层细胞在加入IL2、IL21细胞因子的条件下共培养,使B细胞在体外增殖并获得足够检测的单克隆抗体,利用巢式PCR获得轻重链基因序列片段,真核表达系统表达兔抗人TIM-3单克隆抗体,并通过ELISA、Western blot、流式细胞分析等方法鉴定该抗体亲和性以及在蛋白和细胞层面的特异性。最后,利用CRISPR基因编辑技术构建了TIM-3人源化小鼠,为探究TIM3单克隆抗体的治疗效果以及功能性研究提供基础。本研究使用单个B细胞抗体制备技术获得高效价的人源TIM3单克隆抗体,对于研发的单克隆抗体疗效评估同时构建了人源化TIM3胞外区的模型小鼠与B16黑色素瘤细胞,用于研究其生物学活性以及临床试验研究。对继PD-1/PD-L1抗体药物之后的新免疫检查点治疗药物的研发奠定了坚实的基础并提供科学依据。