【摘 要】
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马立克氏病（Marek’s disease,MD）和传染性法氏囊病（Infectious bursal disease,IBD）是两种高度接触性的病毒性传染病,因具有较高的发病率和死亡率给世界养禽业造成严重的经济损失。使用疫苗免疫是防控MD和IBD的主要手段。然而,大量使用疫苗导致病毒变异,使毒力增强的毒株不断涌现,传统疫苗已不能很好地控制疾病的发展。近年来,基因工程疫苗成为疫苗研发的重要方向,重
【基金项目】
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北京市农林科学院科技创新能力建设专项—马立克氏病病毒CVI988与鸡传染性法氏囊病毒重组疫苗的研究（KJCX201914）； 国家自然科学基金青年基金项目—马立克氏病病毒立即早期蛋白ICP0抑制宿主PML核小体抗病毒活性的机制研究（31902245）；
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马立克氏病（Marek’s disease,MD）和传染性法氏囊病（Infectious bursal disease,IBD）是两种高度接触性的病毒性传染病,因具有较高的发病率和死亡率给世界养禽业造成严重的经济损失。使用疫苗免疫是防控MD和IBD的主要手段。然而,大量使用疫苗导致病毒变异,使毒力增强的毒株不断涌现,传统疫苗已不能很好地控制疾病的发展。近年来,基因工程疫苗成为疫苗研发的重要方向,重组活载体疫苗是基因工程疫苗中具有代表性的种类之一。由于重组活载体疫苗采用的是转基因技术,任何转基因微生物带有新目的基因和表达产物在使用过程中都有可能带来新的风险。因此,本着保障人类和动物健康以及生态环境安全为目的,我们必须对转基因微生物产品进行生物安全评价。本研究将表达传染性法氏囊病病毒VP2基因的重组马立克氏病病毒进行BAC骨架的敲除,再利用有限稀释法对已敲除BAC骨架的重组病毒进行纯化。对优化后的重组病毒进行PCR鉴定,结果显示,成功敲除了重组病毒的BAC骨架。经PCR、Western blot和IFA鉴定,重组病毒能稳定表达具有生物学活性的VP2蛋白,并具有良好的遗传稳定性。同时对优化后的重组病毒进行转基因生物安全评价,通过对靶动物和非靶动物进行安全性试验结果显示,各组试验动物精神状态良好,与对照组相比发育正常,体重无显著性差异。对试验动物进行剖检,各组织器官发育正常,没有出现肿大或萎缩现象,与对照组相比没有显著性差异,组织病理学检测均无明显的病理变化。同居试验结果表明,重组病毒的水平传播能力极低,在外界环境中基本无存活能力。综上所述,重组病毒属于转基因生物安全等级I级的动物用转基因微生物,具有良好的安全性,可以用于开发二联疫苗。
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