目的：（1）比较巢式PCR—RFLP和多重PCR两法在乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）基因型和亚型分型方法的特异性和敏感性，确定HBV基因型亚型分型法。（2）对云南丽江地区纳西族6—12岁儿童的HBV感染进行血清流行病学调查，并应用已建立的方法鉴定纳西族儿童HBV基因型及亚型的研究。 方法：采用型特异性引物的巢式PCR—RFLP法和六种主要的HBV型特异性引物及亚型特异性引物的多重PCR法分别检测100份慢性HBV感染的病人血清，确定HBV基因型和亚型的分型方法。应用酶联吸附免疫法（ELISA法）检测纳西族儿童血清标本HBV的感染情况，并应用已确定的型特异性引物巢式PCR结合聚合酶链反应—限制性片段长度多态性法（PCR—RFLP）对感染者基因型及亚型分型鉴定，并进行测序。 结果：（1）确定HBV基因型和亚型的分型方法：两法符合率仅50%（27/54），不一致率为50%（27/54）。②型特异性引物巢式PCR—RFLP法检测出B基因型41例（41%），C基因型25例（25%）．B+C基因型34例（34%），Bj亚型3例（7．3%），Ba亚型为38例（92．7%），Cs亚型为21例（84%），Ce亚型为3例（12%），1例c型未分出亚型（4%）。多重PCR法检出B型18例（33．3%），C型7例（13%），B+C混和型5例（9．3%），B2亚型2例（11%），C1亚型2例（28．5%）。巢式PCR—RFLP法型检出率100%亚型检出率98．5%，多重PCR法型检出率55．6%，亚型检出率仅为16%，前者高于后者（P<0．05）。（2）丽江纳西族儿童HBV感染的调查研究及HBV基因型亚型的鉴定：①HBV流行率为39．6%（139/351），其中HBsAg阳性率最低为1．7%（6/351），抗—HBs阳性率为30．5%（107/351），全阴性率最高为60．4%；②男生、女生HBsAg阳性样本各3例，抗—HBs阳性率男、女生分别为35．1%、29．9%，全阴性率男、女生分别为57．5%、63．3%。性别之间分布x2=8．333，P>0．05，无统计学意义；③HBV流行率从6岁开始随年龄增长呈上升趋势，9、10岁人群HBV流行率达到峰值（51．6%，51．4%），随后逐渐递减，12岁达到最低点（22．2%），不同年龄段HBV流行率x2=13．1，P<0．05，有统计学意义。④不同年龄段不同HBV血清标志物（HBV markers，HBVM）分布，x2=75．218，P>0．05，无统计学意义。⑤巢式PCR—RFLP检出2例B基因型均为Ba亚型，1例B+C型中分出Ce亚型，无B亚型分出。分型的样本均为大三阳。 结论：（1）巢式PCR—RFLP鉴定HBV基因型及亚型较多重PCR敏感性高，重复性好。（2）丽江纳西族儿童血清流行病学调查结果显示HBV感染呈现出低感染的特征。（3）丽江纳西族儿童HBV流行率与年龄有关；HBV感染血清学标志分布与儿童的性别和年龄无关。（4）在对样本进行HBVM检测初筛的基础上，进行巢式PCR—RFLP HBV基因型及亚型分型，结果2例B型均为Ba亚型，1例B+C型分出Ce亚型，无B亚型分出，分型样本的HBVM均为大三阳模式。（5）为了预防控制丽江纳西族儿童HBV的传播，应加强乙型肝炎疫苗接种的综合措施。