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目的本研究旨在探明脂肪脱细胞基质(decellularized adipose matrix,DAM)联合负压封闭引流(vacuum sealing drainage,VSD)对创面愈合速度、血管化和炎症反应的影响,以在治疗颅骨外露创面中的表现,阐述该治疗的效果和作用机理。方法(1)制备脂肪脱细胞基质材料,HE染色观察其结构和脱细胞效果。创建巴马小型猪背部皮肤软组织创面模型。取12只巴马小型猪,每只小型猪背部制造4个直径4cm的皮肤软组织创面,4个创面随机分组:DAM/VSD组(脂肪脱细胞基质联合负压封闭引流),DAM组(单用脂肪脱细胞基质),VSD组(单用负压封闭引流),空白对照CON组(无菌纱布换药)。创面建立当日及治疗后第7、10、14、17、21日对创面拍照并测量剩余创面面积。治疗后第7、14、21日对创面组织取材,行HE染色、vWF免疫组化染色,并进行微血管计数,行荧光qRT-PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,实时定量聚合酶链反应)检测血管化相关因子表达情况。(2)使用如上所述动物模型,取3、7、10、14日创面组织行HE染色,观察创面组织中性粒细胞浸润情况,计数中性粒细胞数量,荧光qRT-PCR检测创面炎性反应相关因子IL-1 β、IL-6、TNF-αα,和巨噬细胞亚型标记物iNOS、ARG-1的表达情况。(3)创建巴马小型猪颅骨外露创面模型。取巴马小型猪12只,每只小型猪额部制造1个直径2cm、剥去骨膜的颅骨外露创面,随机分为四个治疗组:DAM/VSD组(脂肪脱细胞基质联合负压封闭引流),DAM组(单用脂肪脱细胞基质),VSD组(单用负压封闭引流),空白对照CON组(无菌纱布换药)。创面建立当日及治疗后第7、10、14、17、21日对创面拍照并测量剩余创面面积。治疗后第7、14、21日对创面组织取材,行CD31、α-SMA(α-smooth muscle actin,α-平滑肌肌动蛋白)双染免疫荧光,行荧光qRT-PCR检测血管化相关因子CD31、VEGF的表达情况。结果(1)制备出的DAM在光镜下呈疏松多孔结构,脱细胞基本彻底。DAM/NSD组在治疗后第14、17、21日剩余创面面积少于其他三组,完全上皮化所需时间少于其他三组;在治疗后第14、21日DAM/VSD组创面微血管计数高于其他三组,与之相对应的,在治疗后第7、14日,DAM/VSD组创面组织CD31和VEGF的表达与其他三组相比也明显增高。(2)相对于无菌纱布治疗、单用DAM或VSD,DAM/VSD组创面中性粒细胞浸润程度较轻,促炎因子IL-1 β、IL-6、TNF-α以及M1型巨噬细胞标记物iNOS的表达减少,而与组织修复相关的M2型巨噬细胞标记物ARG-1表达增加。(3)在剥去骨膜的颅骨外露创面中,DAM/VSD组创面同样表现为较其他三组创面愈合速度加快,且更早出现完全上皮化。治疗后第21天CD31、α-SMA免疫荧光双染见DAM/VSD组创面中阳性荧光强度与成熟血管数量高于其他三组。荧光qRT-PCR结果与之相符,在各检测时点DAM/VSD组创面内CD31和VEGF的表达较其他三组均增高。结论(1)DAM作为良好的天然支架材料,与VSD联合使用可促进皮肤软组织创面愈合,与二者单用相比,效果更加显著,表现在加快愈合速度,促进创面新生血管建立,调节炎性因子的表达和巨噬细胞表型的表达,降低继发于炎症反应的组织损害。(2)DAM联合VSD可使去除骨膜的颅骨外露创面愈合,并且能通过促进新生血管形成和成熟的机制加快愈合速度。说明该治疗方法具备使创面跨过缺乏血供区域愈合的能力,将来或可应用于多种难愈性创面的非手术治疗。