脐带间充质干细胞治疗创伤性胰腺炎的实验研究

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目的:创伤性胰腺炎常因胰腺外伤引起发病,临床症状表现为类似急性期的胰腺炎反应,但其发病机制不同于普通急性胰腺炎,常规的急性胰腺炎国内多因胆道梗阻疾病引发胰管堵塞发病、国外多因过量饮酒致病,但创伤性胰腺炎常合并胰腺自身外伤,胰腺损伤的同时常伴发其周围组织器官的损伤,其病情更加复杂。创伤性胰腺炎患者若早期处理不及时将易导致中后期全身性的炎症反应、多器官功能衰竭等复杂且严重并发症发生。因此控制早期病情的进展,将是创伤性胰腺炎治疗的重要环节。间充质干细胞是具备独特免疫调节及炎症控制能力的多功能细胞,在细胞治疗领域具有巨大的潜力。我们中心前期已自行研发了基于损伤范围控制的大鼠胰腺创伤模型,其能有效地模拟临床中胰腺创伤伤情的发生发展。因此本研究主要通过建立大鼠胰腺创伤模型,探讨脐带间充质干细胞移植对大鼠创伤性胰腺炎治疗的安全性与有效性,观察脐带间充质干细胞对大鼠创伤性胰腺炎是否具有一定的保护作用,为胰腺创伤的临床救治提供理论依据和创新性的辅助治疗方法。
  方法:60只健康雄性SD大鼠。随机分为对照组2组:常规对照组(Sham组)以及脐带间充质干细胞对照组(ucMSCs对照组);创伤组1组:即创伤性胰腺炎组(TP组);治疗组1组:脐带间充质干细胞治疗组(TP+ucMSCs治疗组,即ucMSCs治疗组);每组15只。采用自主研发的基于损伤范围控制的胰腺创伤动物模型进行大鼠创伤性胰腺炎造模,造模结束后通过尾静脉注射CM-Dil活细胞染料标记的ucMSCs(1×106个/100g),并于造模后1d,3d,7d处死取材,收集腹水,称重胰腺组织,并行HE染色评估胰腺组织损伤程度;荧光显微镜观察脐带间充质干细胞在大鼠体内各器官的归巢定植情况,免疫荧光观察PDX-1蛋白在胰腺组织中表达,判断胰腺组织创伤后再生修复情况;并检测血清中淀粉酶与脂肪酶、促炎因子与抗炎因子以及氧化应激因子表达水平。
  结果:体外输注的脐带间充质干细胞具有向大鼠损伤部位迁移定植的特性,移植的脐带间充质干细胞在胰腺组织中具有转化为胰腺前体细胞促进损伤胰腺修复的潜能。胰腺创伤后大鼠腹水呈浑浊淡红色,腹水含量明显增多。取胰腺组织称重后提示胰腺创伤组胰腺净湿重重量存在显著增重趋势。与创伤组相比,脐带间充质干细胞治疗组腹水量明显减少,胰腺组织净重量也明显减轻。标准的病理学评分提示经过脐带间充质干细胞移植治疗后胰腺组织综合病理学评分显著降低。胰腺创伤造模后大鼠血清中淀粉酶与脂肪酶指标明显升高,经脐带间充质干细胞移植治疗后有下降趋势。比较胰腺创伤组与脐带间充质干细胞治疗组血清中两酶浓度组间有明显差异。创伤性胰腺炎造模后血清中促炎因子TNF-α及IL-6浓度明显增高,经过脐带间充质干细胞移植治疗后促炎因子血清中表达水平可见明显的下降。相对而言,创伤造模后的抗炎因子TGF-β及IL-10浓度较造模前比较是降低的,但经过使用脐带间充质干细胞移植治疗后其血清中表达水平可见显著的上升。创伤性胰腺炎造模后血清中氧化酶系MDA浓度明显增高而抗氧化酶系SOD浓度显示明显降低。除此之外,在氧化应激调节上,比较胰腺创伤组与脐带间充质干细胞治疗组两氧化应激因子含量组间差异显示,经过脐带间充质干细胞的移植治疗大鼠血清中氧化酶MDA表达水平有下降趋势,而经过脐带间充质干细胞的移植治疗后大鼠血清中抗氧化酶SOD表达水平提示较创伤组增高。
  结论:本实验初步评价了脐带间充质干细胞对大鼠创伤性胰腺炎的治疗作用,证明了脐带间充质干细胞可主动归巢于创伤后胰腺组织,通过促进胰腺组织再生以及免疫调节作用改善创伤性胰腺炎大鼠胰腺组织的损伤,并可减轻创伤性胰腺炎引发的全身性炎症反应和应激反应,从而对大鼠创伤性胰腺炎具有一定的保护作用。
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