【摘 要】
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目的:近期研究表明,代谢是炎症的必备基础,代谢反应对炎症反应具有重要调节作用。本课题组前期研究发现,丙酮酸激酶M2（pyruvate kinase M2,PKM2）在核内聚集伴随丙酮酸水平下调,补充PKM2激动剂和丙酮酸后明显缓解脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）/D-半乳糖氨（d-galactosamine,D-Gal）诱导的急性肝损伤（acute liver injury
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目的:近期研究表明,代谢是炎症的必备基础,代谢反应对炎症反应具有重要调节作用。本课题组前期研究发现,丙酮酸激酶M2（pyruvate kinase M2,PKM2）在核内聚集伴随丙酮酸水平下调,补充PKM2激动剂和丙酮酸后明显缓解脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）/D-半乳糖氨（d-galactosamine,D-Gal）诱导的急性肝损伤（acute liver injury,ALI）,但其机制尚不清楚。我们前期采用磷酸化蛋白抗体芯片检测与其相关的蛋白磷酸化情况时发现与PKM2激动剂TEPP-46组相比,LPS/D-Gal组细胞周期蛋白依赖性激酶1（cyclin-dependent kinases1,CDK1）的磷酸化水平明显增高。因此,本研究从CDK1入手探讨了PKM2激动剂和丙酮酸缓解急性肝损伤的机制。方法:1)雄性BABL/c小鼠经腹腔注射LPS/D-Gal复制急性肝损伤模型。2)LPS/D-Gal注入小鼠后2 h经腹腔注入PKM2激动剂TEPP-46,取小鼠肝组织（LPS/D-Gal组和LPS/D-Gal+TEPP-46组）,采用免疫印迹法验证芯片检测获得的磷酸化蛋白,确定与急性肝损伤相关的蛋白CDK1的磷酸化水平变化情况。在LPS/D-Gal注入小鼠后2 h经腹腔注入丙酮酸衍生物丙酮酸乙酯（ethyl pyruvate,EP）,6 h后获取肝组织,采用免疫印迹法验证p-CDK1的表达。3)为进一步验证PKM2激动剂缓解LPS/D-Dal诱导的急性肝损伤的作用及机制,我们换了另外一种PKM2激动剂DASA-58。雄性BALB/c小鼠24只随机分为3组（空白对照组、LPS/D-Gal组、LPS/D-Gal+PKM2激动剂DASA-58组）,LPS/D-Gal经腹腔注入后6 h检测血浆转氨酶ALT、肝组织形态学改变、肝组织caspase-3活性、肝细胞凋亡情况及p-CDK1表达水平。4)为了探讨PKM2激动剂和丙酮酸是否通过增加CDK1活性缓解LPS/D-Gal诱导的急性肝损伤,将56只雄性BALB/c小鼠随机分为7组（空白对照组、CDK1抑制剂RO3306组、LPS/D-Gal组、LPS/D-Gal+TEPP-46/EP组、LPS/D-Gal+RO33306+TEPP-46/EP组）,LPS/D-Gal注入后1.5 h经腹腔注入RO3306,LPS/D-Gal注入后2 h经腹腔注入TEPP-46或EP。LPS/D-Gal注入后6 h麻醉并处死小鼠,获得血浆和肝组织。检测小鼠血浆中ALT、AST活性,通过对肝组织切片进行HE染色观察肝组织形态,采用TUNEL染色观察凋亡细胞的数量,采用比色法检测caspase-3活性。结果:1)经TEPP-46或丙酮酸处理LPS/D-Gal诱导的急性肝损伤,与LPS/D-Gal组相比,TEPP-46或丙酮酸处理组p-CDK1水平明显降低。2)经DASA-58处理LPS/D-Gal诱导的急性肝损伤,与LPS/D-Gal组相比,DASA-58处理组ALT活性明显下调,肝组织形态异常缓解,并降低caspase-3活性以及减少凋亡细胞的数量。免疫印迹显示,与LPS/D-Gal组相比,DASA-58处理组p-CDK1水平明显降低。3)经RO3306联合使用TEPP-46或EP处理LPS/D-Gal诱导的急性肝损伤,RO3306联合TEPP-46处理组血浆转氨酶ALT明显高于TEPP-46处理组。RO3306联合EP处理组血浆转氨酶ALT、AST明显高于EP处理组。同时,肝组织病理切片HE染色和TUNEL染色结果显示,与TEPP-46处理组或EP处理组相比,使用RO3306组明显逆转TEPP-46或EP缓解的肝组织形态的变化,并且凋亡细胞数量明显增多以及明显上调caspase-3的活性。结论:本研究结果表明,PKM2激动剂和丙酮酸缓解LPS/D-Gal诱导的急性肝损伤的机制与抑制p-CDK1的水平、增加CDK1活性有关,抑制p-CDK1增加CDK1活性可能在急性肝损伤的防治与治疗中具有潜在的应用前景。
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目的:观察对比慢性脑缺血小鼠脑和视网膜小胶质细胞（MG）在不同时间点的时空变化。方法:3月龄C57BL/6J小鼠行改良型双侧颈总动脉结扎（2VO）制作慢性脑缺血模型,甲苯胺蓝染液心尖灌注观察验证模型。建模后7d、14d、28d,分别取脑组织和视网膜进行组织学和免疫组化染色,观察脑组织海马、皮质以及视网膜的病理改变,以及MG标志物IBA1、M1型指标i NOS、M2型指标TREM2的表达变化。结果:
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肺癌是我国发病率及致死率均处于高水平的恶性肿瘤,而癌细胞转移扩散是导致其致死率高的重要因素。癌细胞获得异常迁移运动能力是恶性肿瘤转移的关键事件,但其牵涉的具体分子机理仍不明确。对癌细胞异常迁移运动的调控机制展开深入研究,不仅对于拓展肿瘤生物学基础理论具有重要科学意义,且对于实现肿瘤的精准诊断和靶向治疗,提高患者生存率也具有重要现实意义。丝状伪足是位于运动细胞前缘的一种指状结构,源于肌动蛋白微丝骨架
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目的EB病毒（Epstein-Barr virus,EBV）是一种致癌性疱疹病毒,全世界约90%的人感染。大多数人EBV感染呈终身无症状潜伏感染,但部分感染者会出现相关疾病。目前已知与EBV感染相关的疾病有几十种,但各种疾病的临床表现多样,组织学形态广泛,不同疾病之间临床病理特点重叠。患者病情轻重不一,部分疾病预后较差。EBV的致病机制仍不完全清楚,目前研究认为是体内抗病毒免疫与病毒致病性间的平衡