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目的:研究两种不同类型乳腺癌细胞条件培养基(CM)对成骨细胞的增殖作用的影响,并初步探讨其是否通过调节Notch信号通路中的Notch1、Jagged1、Hes1的蛋白与m RNA的表达影响成骨细胞的增殖活性,为临床上治疗乳腺癌骨转移提供新的潜在的治疗靶点。方法:1、MTT法检测两种不同类型乳腺癌细胞(MDA-MB-231、MCF-7)CM不同浓度(0、20%、40%、60%、80%、100%)与不同时间(0、24、48、72、96h)对成骨细胞的增殖作用抑制的量效与时效性;经DAPT(Notch阻断剂)干扰后对成骨细胞的影响;流式细胞术检测两种不同类型乳腺癌细胞CM(60%)对成骨细胞周期的影响;Western Blot检测其周期蛋白Cyclin A2的表达。2、Western Blot与q RT-PCR分别检测两种不同类型乳腺癌细胞CM(0、20%、40%、60%、80%、100%)对成骨细胞的Notch信号通路中的Notch1、Jagged1、Hes1的蛋白与m RNA的表达;以及两种不同类型乳腺癌细胞CM(60%)经DAPT(Notch阻断剂)处理的成骨细胞的Notch信号通路中的Notch1、Jagged1、Hes1的蛋白与m RNA的表达。结果:1、不同浓度MDA-MB-231、MCF-7乳腺癌细胞CM都能一定程度地抑制成骨细胞的增殖。两种MDA-MB-231、MCF-7乳腺癌细胞CM不同浓度(0、20%、40%、60%、80%、100%)处理成骨细胞后,随着浓度与时间的增加,抑制作用更明显,在量效与时效上都呈正相关性;同时,流式细胞术检测的结果也证明两者都能抑制成骨细胞的增殖,主要影响的是S期,即RNA合成期;Western Blot的结果也证明两者能抑制周期蛋白Cyclin A2的表达,而MCF-10乳腺细胞不影响成骨细胞的增殖。以上结果均可以证明,MDA-MB-231、MCF-7乳腺癌细胞CM适当的浓度能一定程度地抑制成骨细胞的增殖。2、不同浓度MDA-MB-231、MCF-7乳腺癌细胞CM能上调成骨细胞中Notch信号通路的相关Notch1,Jagged1,Hes1的蛋白与m RNA的表达。两种不同浓度MDA-MB-231、MCF-7乳腺癌细胞CM(0、20%、40%、60%、80%、100%)处理成骨细胞后,其中,在浓度为40%与60%时,Notch1,Jagged1,Hes1的蛋白与m RNA表达最高,随着浓度(80%,100%)的增大,成骨细胞出现凋亡现象,以上三种蛋白与m RNA的表达逐渐下降;当加入DAPT(Notch阻断剂)后,以上三种蛋白与m RNA的表达均下调;同时,在MDA-MB-231乳腺癌细胞CM处理成骨细胞中,Hes1的蛋白与m RNA在浓度为20%时表达开始上调,而在MCF-7乳腺癌细胞CM处理成骨细胞中,Hes1的蛋白与m RNA在浓度为40%时表达才上调,这表明Notch信号通路对MDA-MB-231乳腺癌发生骨转移的影响大于MCF-7乳腺癌。结论:1、乳腺癌细胞(MDA-MB-231、MCF-7)CM能够抑制成骨细胞的增殖;2、乳腺癌细胞(MDA-MB-231、MCF-7)CM抑制成骨细胞的增殖作用与Notch信号通路有关,且MDA-MB-231的CM对成骨细胞Notch信号通路的相关靶基因Hes1影响更明显。