钙调素（Calmodulin,CaM）是一种Ca²⁺结合蛋白,是一种重要的信号转导分子,Ca²⁺/CaM是目前植物细胞信号转导系统中研究得最为深入和广泛的途径之一。本实验室前期工作证明了小麦钙调素（Triticum aestivum Calmodulin,TaCaM）在不亲和的叶锈菌小种刺激下表达量升高,初步证明Ca²⁺/CaM参与了小麦抵抗叶锈菌侵染诱发的过敏性反应（Hypersensitive reaction,HR）。如果进一步深入探讨CaM在小麦抵抗叶锈菌侵染诱发的HR中的作用,TaCaM特异性抗体的制备将是必须的,它是CaM定位、定量及生理功能研究中最有效、最特异的试剂。本文设计试验制备兔抗TaCaM抗血清,并通过PVDF膜结合法纯化获得了特异性多克隆抗体。这项试验为进一步研究CaM在小麦与叶锈菌互作过程中的时空分布特征及功能奠定了基础;亦为构建各亚型TaCaM重组子,分别纯化它们的特异性多克隆抗体提供了切实可行的实验手段。首先以小麦叶片为材料,提取CaM蛋白,经加热、硫酸铵沉淀、等电点沉淀、透析等方法初步纯化,然后以其为抗原免疫家兔,制备了兔抗TaCaM抗血清。以大肠杆菌中诱导表达的拟南芥CaM蛋白作为抗原,运用酶联免疫吸附测定（Enzyme-linked immunosorbant assay,ELISA）检测其效价。结果表明免疫前的对照血清对抗原基本没有反应,而加强免疫后的抗血清效价不断提高,末次免疫后抗血清的效价都在1:256 000以上。再以大肠杆菌中诱导表达的拟南芥CaM蛋白作为抗原,用PVDF膜结合法纯化该抗血清,并以Westen Blotting对所纯化的多克隆抗体进行鉴定。结果表明纯化后的CaM多克隆抗体与初步纯化的TaCaM能够特异结合。重要的是在小麦全蛋白中也能检测出CaM特异条带,并且与纯化前的抗血清检测的初步纯化的TaCaM相比,条带更加清晰。说明所纯化的抗体是针对TaCaM的特异性多克隆抗体。另外,本试验从小麦叶片中提取总RNA,依据已经报道的存在于小麦品种中国春中表达3种TaCaM亚型的3种基因分别设计了引物,通过RT-PCR的方法扩增TaCaM的cDNA,为进一步获得各亚型TaCaM的重组子提供了前期工作。